[發明專利]橋連有抗體的磁性微球復合制劑及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710040715.3
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN108333361A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 饒微;劉坤;袁錦云;劉來壯;李婷華;付金秋
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所 44237
• 代理人: 左光明

本發明公開了一種橋連有抗體的磁性微球復合制劑及其制備方法、AFP?L3分離檢測劑、試劑盒和系統。本發明磁性微球復合制劑包括橋連載體，所述橋連載體包被磁性微球和偶聯抗AFP抗體，所述抗AFP抗體的Fc片段被切除。本發明AFP?L3分離檢測劑、試劑盒和系統均包括橋連有抗體的磁性微球復合制劑和發光標記物標記的凝集素。本發明橋連有抗體的磁性微球復合制劑有效避免了凝集素與抗體發生非特異的結合，提高了待測AFP?L3抗原與抗AFP抗體的特異結合，從而提高檢測AFP?L3抗原的特異性和準確性，因此，本發明AFP?L3分離檢測劑、試劑盒和系統檢測AFP?L3抗原的特異性和準確性高。

技術領域

本發明屬于體外診斷試劑技術領域，具體的是涉及一種橋連有抗體的磁性微球復合制劑及其制備方法、AFP-L3分離檢測劑、AFP-L3分離檢測試劑盒、AFP-L3分離檢測系統。

背景技術

原發性肝癌，發生于肝細胞或肝內膽管細胞，是全球范圍內致死率僅次于肺癌和胃癌的惡性腫瘤。其發病機制至今未研究清楚，目前認為病毒性肝炎、肝硬化、化學致癌物如黃曲霉毒素以及環境污染等因素等造成的肝細胞損傷都有可能誘發原發性肝癌。由于原發性肝癌惡性程度高，易轉移和復發，早期診斷難以及時發現，容易錯過最佳治療時期，因此，針對原發性肝癌的生物標志物的檢測對于該病的早期診斷、治療檢測和預后判定具有十分重要的意義。

甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein/AFP)，一種分子量約69Kda的單鏈糖蛋白，過去一直被認為是診斷原發性肝癌的特異性腫瘤標志物，具有確立診斷、早期診斷、鑒別診斷的作用。大量的臨床卻發現，部分肝硬化病人的血清中會長期出高濃度AFP，但多年都沒有肝癌的跡象；同時發現約20％的晚期肝癌病人，AFP仍處于較低濃度。早在70年代，研究人員發現在對AFP進行凝膠電泳分析時，AFP存在不同的遷移率，根據與扁豆凝集素結合后不同的電泳帶，將AFP分為三類，分別為源自良性肝病細胞分泌的AFP-L1、源自孕婦體內分泌的AFP-L2以及源自肝癌細胞分泌的AFP-L3(甲胎蛋白異質體Alpha-fetoprotein variant/AFP-L3)，其中，AFP-L3用于肝癌診斷具有高敏感性和特異性，被作為新一代肝癌標志物。美國FDA于2005年批準該指標應用于肝癌預警，并把AFP-L3/AFP診斷肝癌的陽性界定值定為10％。AFP-L3被公認是比AFP更為特異的原發性肝癌指標。

當前檢測AFP-L3的方法有多種，其檢測原理主要根據不同AFP對植物性扁豆凝集素具有不同親和力而達到分離從而實現檢測。常用的檢測方法主要有免疫交叉電泳技術(考馬斯亮藍法、放射自顯影法、金銀染色法)、免疫印跡法、親和層析法、LiBASys系統自動分析法、雙位點夾心酶免法、微流控芯片分析法、免疫磁性微球捕獲分離法等。其中，免疫交叉電泳技術和免疫印跡法因制備要求高、操作復雜、需要專門檢測人員，耗時耗力，限制了其在臨床上的應用；LiBASys系統自動分析法需要特殊的檢測系統，操作繁瑣，設備昂貴，難以在中小城市普及應用；雙位點夾心酶免法需要制備特殊的單克隆抗體且僅限于實驗研究，重復性難以保證，無法實現批量穩定生產和臨床應用；微流控芯片分析法目前尚處于研究階段，還無法大規模進行推廣應用；而免疫磁性微球捕獲分離法雖然操作簡便、分離迅捷，但分離后仍需要額外配備試劑盒檢測，目前該項目仍無成熟的商業試劑盒上市。親和層析法雖然制備方法簡單，無需特殊設備，但該法需要人工操作，耗時費力，且無法實現自動化檢測。