[發(fā)明專利]橋連有抗體的磁性微球復(fù)合制劑及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710040715.3
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN108333361A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 饒微;劉坤;袁錦云;劉來壯;李婷華;付金秋
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 深圳中一專利商標(biāo)事務(wù)所 44237
• 代理人: 左光明

1.一種橋連有抗體的磁性微球復(fù)合制劑，包括磁性微球，其特征在于，還包括：

抗AFP抗體，所述抗AFP抗體的Fc片段被切除；

橋連載體，所述橋連載體包被所述磁性微球和偶聯(lián)所述抗AFP抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性微球復(fù)合制劑，其特征在于：所述橋連載體為N-羥基琥珀酰亞胺-(聚乙二醇)_n-馬來酰亞胺基團(tuán)，其中，n為4-24。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性微球復(fù)合制劑，其特征在于：所述磁性微球與橋連載體的質(zhì)量比為(50-200)：1；

所述橋連載體與所述抗AFP抗體摩爾比為1：1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的磁性微球復(fù)合制劑，其特征在于：所述抗AFP抗體所保留的能夠與抗原識別的抗體片段為F(ab)₂’片段、Fab片段、Fab’片段中的至少一種；和/或

所述橋連載體偶聯(lián)在所述抗AFP抗體的切除所述Fc片段酶切部位。

5.一種橋連有抗體的磁性微球復(fù)合制劑的制備方法，包括如下步驟：

將抗AFP抗體中抗體Fc片段切除并分離，得到能夠與抗原識別的含抗體片段的抗體；

在所述抗體上偶聯(lián)橋聯(lián)載體，形成抗體-橋聯(lián)載體偶聯(lián)物；

將所述抗體-橋聯(lián)載體偶聯(lián)物包被磁性微球，得到權(quán)利要求1-4任一所述的橋連有抗體的磁性微球復(fù)合制劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：在所述抗體上偶聯(lián)橋聯(lián)載體的方法包括如下步驟：

將所述抗體與異形雙功能交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，生成抗體-酰亞胺酯；

將所述抗體-酰亞胺酯經(jīng)還原劑還原處理，生成抗體-SH；

將異形雙功能交聯(lián)劑與橋聯(lián)載體化合物進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，生成橋聯(lián)載體-酰亞胺酯；

將所述抗體-SH與所述橋聯(lián)載體-酰亞胺酯進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，生成所述抗體-橋聯(lián)載體偶聯(lián)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：在所述抗體上偶聯(lián)橋聯(lián)載體的方法包括如下步驟：

將橋聯(lián)載體化合物與異形雙功能交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，生成橋聯(lián)載體-酰亞胺酯；

將所述橋聯(lián)載體-酰亞胺酯經(jīng)還原劑還原處理，生成橋聯(lián)載體-SH；

將異形雙功能交聯(lián)劑與所述抗體進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，生成所述抗體-酰亞胺酯；

將所述橋聯(lián)載體-SH與所述抗體-酰亞胺酯進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，生成所述抗體-橋聯(lián)載體偶聯(lián)物。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于：所述異形雙功能交聯(lián)劑選用3-(2-吡啶二巰基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯、琥珀酰亞胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯酰胺基]己酯、N-[κ-馬來酰亞胺十一酰氧]-琥珀酰亞胺酯中的任一種或兩種以上的混合物；和/或

所述橋聯(lián)載體化合物為馬來酰亞胺-聚乙二醇聚合物；和/或

所述還原劑選用二硫蘇糖醇、β-巰基乙醇、三(2-羧乙基)膦、十二烷基硫酸鈉中的任一種或兩種以上的混合物。

9.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一所述的制備方法，其特征在于：所述抗體含的所述抗體片段為F(ab)₂’片段、Fab片段、Fab’片段中的至少一種；和/或

切除所述抗體Fc片段的方法是采用酶切處理除去，且所述酶切處理所用的酶選用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶中的任一種，且所述抗AFP抗體與所述酶的質(zhì)量比例為(10-40):1。

10.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一所述的制備方法，其特征在于：所述包被處理過程中，所述抗體-橋聯(lián)載體偶聯(lián)物與所述磁性微球的質(zhì)量比例為(50-200)：1；和/或

所述磁性微球為被活化處理，所述活化處理所用的活化劑選用N,N'-二異丙基碳二亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、二環(huán)己基碳二亞胺中的任一種或兩種的混合物。