[發明專利]用于人KRAS基因突變檢測的引物、探針及試劑盒在審
| 申請號： | 201710040408.5 | 申請日： | 2017-01-20 |
| 公開（公告）號： | CN108330191A | 公開（公告）日： | 2018-07-27 |
| 發明（設計）人： | 馬永;丁燕芬;丁娜 | 申請（專利權）人： | 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司;常州京森生物醫藥研究所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 213125 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 突變檢測 試劑盒 探針 引物 檢測 試劑盒檢測 靈敏度 規?；?/a> 野生型 擴增 突變 篩選 優化 | ||
1.用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，分別包括：
用于檢測Gly13Asp突變的如SEQ ID NO：4所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Ser突變的如SEQ ID NO：9所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Arg突變的如SEQ ID NO：10所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Cys突變的如SEQ ID NO：13所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Asp突變的如SEQ ID NO：15所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Ala突變的如SEQ ID NO：23所示的突變上游引物，和/或
用于檢測Gly12Val突變的如SEQ ID NO：27所示的突變上游引物；以及
如SEQ ID NO：29所示的突變下游引物；
如SEQ ID NO：30所示的內控或外控上游引物；
如SEQ ID NO：31所示的內控或外控下游引物；
如SEQ ID NO：32所示的突變探針；
和如SEQ ID NO：33所示的內控或外控探針。
2.根據權利要求1所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：所述用于人KRAS基因突變檢測的內控探針，5’端修飾VIC或HEX熒光基團；3’端修飾BHQ-1熒光基團。
3.根據權利要求1所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：所述用于人KRAS基因突變檢測的外控探針，5’端修飾FAM熒光基團，3’淬滅基團為BHQ1。
4.根據權利要求1所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：試劑盒反應體系中含有1uM上下游引物各1-3uL、1uM突變探針0.5-1.5uL、1uM內控或外控探針1-2uL。
5.根據權利要求4所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：試劑盒反應體系中還包括1U UNG酶、0.25-0.5U Taq酶、4uL 10*緩沖液、25mM MgCl2 3-5uL、10uM dUplus dNTP 0.6-1.0uL、DNA模板10ng、ddH2O。
6.根據權利要求5所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：所述10*緩沖液的成分及含量：100mM Tris-HCl(PH 8.8)、500mM KCl、15mM MgCl2、0.8％(V/V)NP-40。
7.根據權利要求5或6所述的用于人KRAS基因突變檢測的試劑盒，其特征在于：Taq酶由如SEQ ID NO：34的核苷酸序列重組表達得到。
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