[發明專利]靶向CD19嵌合抗原受體并對其雙重修飾的方法及其用途

有效

• 申請號: 201710040361.2
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108330133B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 黃飛;金濤;王海鷹;何鳳;史子嘯
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N7/01;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發明涉及靶向CD19的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發明提供一種多核苷酸序列，選自：(1)含有依次連接的抗CD19單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區的編碼序列、人CD28跨膜區的編碼序列、人CD28胞內區的編碼序列、人CD3ζ胞內區的編碼序列和任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段、抗人的PD1序列片段的編碼序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。本發明還提供相關的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。本發明制備的CAR?T細胞對特異性腫瘤細胞都具強烈的殺傷功能，在效靶比是1:2的情況下對特異性腫瘤細胞殺傷效率達到90％以上。本發明制備的CAR?T細胞帶有分泌PD1抗體功能，對免疫抑制微環境具有調節作用。

技術領域

本發明屬于嵌合抗原受體領域，具體涉及靶向CD19的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術

嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T細胞是指經基因修飾后，能以MHC非限制性方式識別特定目的抗原，并且持續活化擴增的T細胞。2012年國際細胞治療協會年會中指出生物免疫細胞治療已經成為手術、放療、化療外的第四種治療腫瘤的手段，并將成為未來腫瘤治療必選手段。CAR-T細胞回輸治療是當前腫瘤治療中最明確有效的免疫治療形式。大量研究表明，CAR-T細胞可以有效的識別腫瘤抗原，引起特異性的抗腫瘤免疫應答，顯著改善患者的生存狀況。

嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經過CAR改造的T細胞相較于天然T細胞表面受體TCR能夠識別更廣泛的目標。CAR的基礎設計中包括一個腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen，TAA)結合區(通常來源于單克隆抗體抗原結合區域的scFV段)，一個胞外鉸鏈區，一個跨膜區和一個胞內信號區。目標抗原的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造T細胞自身的安全性來講都是關鍵的決定因素(Science,1986.233(4770):p.1318-21.)。

CD19是一種B細胞表面的95kDa的糖蛋白，從B細胞發育的早期即開始表達，直至其分化為漿細胞。CD19是免疫球蛋白(Ig)超家族的成員之一，作為B細胞表面信號轉導復合物的組成元素之一，參與調控了B細胞受體的信號轉導過程。在CD19缺陷的小鼠模型中，外周淋巴組織中B細胞的數量會出現明顯的減少，對疫苗和絲裂原的應答也會下降，同時伴有血清Ig水平的減低。通常認為，CD19的表達只限于B細胞系(B-cell lineage)，而不表達于多能造血干細胞表面。CD19還表達于大多數B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、ALLs、CLLs、多毛細胞白血病，和一部分急性髓性白血病細胞的表面。因此，在對白血病/淋巴瘤的治療中，CD19是一種非常有價值的免疫治療靶點。重要的是，CD19不會表達于除B細胞外的大多數正常細胞表面，包括多能造血干細胞，這一特征使CD19可以作為一種安全的治療靶點，可將患者發生自身免疫性疾病或不可逆性骨髓毒性損傷的風險降至最低。當前，已經研制出了抗CD19的抗體或scFv片段，并且在小鼠模型和人類/靈長類動物中證明了其應用的前景。