[發明專利]靶向CD19嵌合抗原受體并對其雙重修飾的方法及其用途

有效

• 申請號: 201710040361.2
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108330133B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 黃飛;金濤;王海鷹;何鳳;史子嘯
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N7/01;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸的序列選自：

(1)含有依次連接的抗CD19單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區的編碼序列、人CD28跨膜區的編碼序列、人CD28胞內區的編碼序列、人CD3ζ胞內區的編碼序列、EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列、和抗人的PD1單鏈抗體的編碼序列的多核苷酸序列，所述的抗人PD1單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第918-1030位氨基酸所示；所述的抗人PD1單鏈抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1046-1152位氨基酸所示，和

(2) (1)所述多核苷酸序列的互補序列，

所述抗CD19單鏈抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第22-128位氨基酸所示；所述抗CD19單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第144-263位氨基酸所示；所述人CD8α鉸鏈區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第264-310位氨基酸所示；所述人CD28跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第311-337位氨基酸所示；所述人CD28胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第338-378位氨基酸所示；所述人CD3ζ胞內區的氨基酸序列如SEQ IDNO:1第379-489位氨基酸所示；所述EGFR的片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第538-872位氨基酸所示。

2.如權利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列在所述抗CD19單鏈抗體的編碼序列前還含有信號肽的編碼序列。

3. 如權利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ IDNO:1第1-21位氨基酸所示。

4.如權利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列還含有GM-CSF受體α鏈信號肽的編碼序列，所述GM-CSF受體α鏈信號肽設置于所述EGFR片段的N端。

5. 如權利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述GM-CSF受體α鏈信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第516-537位氨基酸所示。

6.如權利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列還含有連接所述GM-CSF受體α鏈信號肽與所述人CD3ζ胞內區的接頭序列的編碼序列。

7. 如權利要求6所述的多核苷酸，其特征在于，所述接頭序列的氨基酸序列如SEQ IDNO:1第490-515位氨基酸所示。

8.如權利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，在所述抗CD19單鏈抗體的編碼序列前的所述信號肽的編碼序列如SEQ ID NO:2第1-63位核苷酸序列所示。