[發明專利]過氧亞硝酸根離子檢測探針、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710039150.7
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN106905235B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 盧忠林;何蘭;龔兵;李志恒;劉睿
• 申請（專利權）人: 北京師范大學
• 主分類號: C07D219/04
• 分類號: C07D219/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

本發明提供一種過氧亞硝酸根離子檢測探針，所述過氧亞硝酸根離子檢測探針AH?1，分子式為C₂₀H₁₅NO₂。本發明還公開了所述過氧亞硝酸根離子檢測探針的制備方法及其應用。本發明提供的過氧亞硝酸根離子檢測探針的分子結構中包含一個9,10?二氫吖啶(DHAC)響應單元，探針本身無熒光，當與過氧亞硝酸根離子反應后，可以生成具有熒光的產物，且該檢測過程具有反應迅速、靈敏，專一性好的特點。同時，該探針合成簡單，易于修飾，具有很好的生物相容性，可用于生物體系中內源型過氧亞硝酸根離子的檢測。

技術領域

本發明屬于離子探針技術領域，具體涉及一種可用于生物體系中內源型過氧亞硝酸根離子檢測探針、制備方法及其應用。

背景技術

過氧亞硝酸根離子(ONOO^-)是人體內一種具有極高反應活性的強氧化性物質，線粒體是產生該物質的主要細胞器。它由體內的一氧化氮(NO)和超氧陰離子(·O₂^-)反應生成，該反應速度快，且不需要酶參與。過氧亞硝酸根離子可以和多種生物分子反應并參與很多生理過程，因此，過氧亞硝酸根離子與眾多疾病相關，如休克、動脈粥樣硬化、缺血-再灌注損傷、老年癡呆、免疫系統病等。但是近年來一些研究表明，過氧亞硝酸根離子在免疫及神經信號傳導等方面也會產生積極作用。因此，生物體內過氧亞硝酸根離子的檢測及生物成像對生理學研究有重要意義。

但是，由于過氧亞硝酸根離子活性高、半衰期短、代謝產物復雜，因此其檢測具有一定難度。目前大多數過氧亞硝酸根離子檢測的熒光探針都存在反應速度較慢、靈敏度較差、選擇性較差等缺點。因此，制備新型高效過氧亞硝酸根離子檢測探針，尤其是開發新的響應單元具有重要意義。

發明內容

作為各種廣泛且細致的研究和實驗的結果，本發明的發明人已經發現，以9,10-二氫吖啶(DHAC)為響應開關可作為過氧亞硝酸根離子檢測探針，在體外或細胞內可快速、專一地檢測過氧亞硝酸根離子。基于這種發現，完成了本發明。

本發明的一個目的是解決至少上述問題或缺陷，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種過氧亞硝酸根離子檢測探針，其能夠在體外或細胞內檢測過氧亞硝酸根離子，具有很好的專一性和靈敏度。

本發明還有一個目的是提供過氧亞硝酸根離子檢測探針的合成方法，以及該過氧亞硝酸根離子檢測探針體外或細胞內檢測過氧亞硝酸根離子的具體方法。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種過氧亞硝酸根離子檢測探針AH-1，所述過氧亞硝酸根離子檢測探針的結構式如下：

本發明的目的還可以進一步由過氧亞硝酸根離子檢測探針AH-1的制備方法來實現，該方法的合成路線如下：

所述方法具體步驟包括：

步驟i、冰水浴下，稱取鄰碘苯甲酸和濃硫酸于圓底燒瓶中，將過硫酸鉀分批加入所述圓底燒瓶中，反應30分鐘后，加入苯，室溫下劇烈攪拌5小時后，將所述圓底燒瓶中混合物倒在碎冰上，用氫氧化鈉溶液調節pH大于10后，二氯甲烷萃取，分離有機相，經洗滌、干燥后，減壓蒸餾除去溶劑得到化合物1；

步驟ii、稱取所述步驟i得到的化合物1、2-氨基二苯甲酮以及催化劑于兩口瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺使之溶解，在氬氣氣氛下加熱反應5小時后，減壓蒸餾除去溶劑，向殘留物中加入冰醋酸和濃硫酸，加熱反應1小時后，將所述兩口瓶中混合物倒入冰水中，抽濾并向濾液中加入堿中和酸，抽濾，得到的濾渣通過柱層析分離得到化合物A-1；