[發明專利]原多甲藻的培養基與培養方法

有效

• 申請號: 201710038090.7
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN106635815B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 王磊;吳海燕;李清云;譚志軍;彭吉星;郭萌萌;翟毓秀
• 申請（專利權）人: 青島科技大學;中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 李晶晶

本發明公開了一種原多甲藻培養基和培養方法，培養基包括下列重量的組分：NH₄NO₃，20?100mg；CO(NH₂)₂(尿素)，20?60mg；KH₂PO₄，1?10mg；NaHCO₃，100?800mg；MnCl₂·4H₂O 15?50g；FeC₆H₅O₇·5H₂O(檸檬酸鐵)，10?30mg；VB12，1×10^?5?1×10^?3mg；VB1，50?200mg；KCl，0.5?5mg；Na₂EDTA 10?15g；殼寡糖0.2?5g（分子量1500?2000Da）海水1000mL。原多甲藻培養基的培養方法，包括如下步驟：第一階段：三角燒瓶培養；第二階段：礦泉水桶培養。本發明給出了原多甲藻培養的最適營養鹽配方，可提高原多甲藻毒素產量并降低養殖成本。且采用礦泉水桶培養原多甲藻與傳統的露天開放水泥池式擴大培養相比，成本低，不易污染，易于操作，大大降低了工作量，使原多甲藻生長速度大幅度提高，培養周期縮短。

技術領域

本發明涉及一種原多甲藻培養基配方及采用礦泉水桶充當容器的養殖方法。屬于海洋微藻養殖領域。

背景技術

貝類毒素因其強毒性和不可預見性等特點，對消費者健康安全和近海生態安全存在嚴重威脅，是近年來國際社會較為關注的生態災害和重大海洋環境問題。氮雜螺環酸毒素（Azaspiracid，AZA）是現有的八大類貝類毒素中發現最晚但毒性最強的一類新型脂溶性貝類毒素，因其毒性強、殘留高且代謝慢，成為歐盟、美國、加拿大等國家重點關注的對象，不僅將其限量標準設定為160 μg AZA-1 eq/kg（AZA1-3），數值普遍低于其他貝類毒素，且在國際貿易中重點加以監控。

因此，原多甲藻酸貝類毒素的檢測工作，已成為出口貿易和保障消費者安全必要保證。目前國際上標準物質制備方法多是將陽性貝類樣品經過萃取純化后制備而成的，存在的主要問題是樣品來源不穩定，批次間存在較大差異；且所需陽性貝類樣品量大，運輸及提取加工前處理復雜。而以產毒藻為來源的毒素標準品制備，不僅能保障這一毒素的穩定來源，而且由于基質干擾少，是目前最好的標準品制備原料。本申請人于2016年4月8日申請保藏一種氮雜螺環酸毒素的產毒原多甲藻，保藏于中國典型微生物保藏中心，分類命名為：Azadinium poporum AZDY06，生物保藏號為CCTCC NO：M 2016181。具有優良的產毒性狀，已初步開發出毒素的提取純化過程。而目前產毒藻的連續擴大培養、營養液循環與補充以及高濃度產毒藻的收集，成為這一技術的主要制約瓶頸。

目前，采用傳統f/2培養基進行原多甲藻培養，藻細胞生長緩慢、細胞密度低、單細胞產毒能力弱（40fg/cell AZA2）、擴大培養時易污染且離心收集耗時。因此，急需開發產毒原多甲藻的擴大培養與毒素制備原料高效收集方法。傳統藻細胞擴大培養的方法是露天開放水泥池式培養，藻細胞極易受到污染。本發明給出了原多甲藻培養的最適營養鹽配方，采用礦泉水桶通CO₂方法培養原多甲藻，最大藻細胞密度可達6.5×10⁶cells/ml，最高產毒達（320fg/cell AZA2），整體毒素產量提高了6倍，通過沉降絮凝方式收集的產毒藻，大大降低工作量。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種原多甲藻的培養基和培養方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

本發明提供的原多甲藻培養基，包括下列重量的組分：