[發(fā)明專利]原多甲藻的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710038090.7
• 申請(qǐng)日: 2017-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN106635815B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王磊;吳海燕;李清云;譚志軍;彭吉星;郭萌萌;翟毓秀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué);中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 李晶晶

1.一種原多甲藻培養(yǎng)基，其特征在于，包括下列重量的組分：

NH₄NO₃，20-100mg；CO(NH₂)₂，20-60mg；KH₂PO₄，1-10mg；碳酸氫鹽，100-800mg；MnCl₂·4H₂O，15-50g； FeC₆H₅O₇·5H₂O，10-30mg；VB12，1×10^-5-1×10^-3mg；VB1，50-200mg；KCl，0.5-5mg；Na₂EDTA 10-15g；分子量1500-2000Da的殼寡糖0.2-5g，海水1000mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原多甲藻培養(yǎng)基，其特征在于，包括下列重量的組分：

NH₄NO₃，30mg；CO(NH₂)₂，40mg；KH₂PO₄，5mg；碳酸氫鹽，500mg； MnCl₂·4H₂O 26g、FeC₆H₅O₇·5H₂O 20mg；VB12，1×10^-4mg；VB1，100mg；KCl，3mg；Na₂EDTA 12.4g，分子量1500-2000Da的殼寡糖1g，海水1000mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的原多甲藻培養(yǎng)基，其特征在于，所述的碳酸氫鹽選自碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫銨中的一種或多種的組合。

4.權(quán)利要求1所述的原多甲藻培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1) 將所述培養(yǎng)基配方中的海水滅菌待用；

2)將所述培養(yǎng)基配方中剩余的組分按照順序和劑量依次加入到步驟1)滅菌的海水中，加入后再充分?jǐn)?分鐘，即可接種使用。

5.產(chǎn)毒原多甲藻的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：

第一階段：三角燒瓶培養(yǎng)；海水為經(jīng)0.45μm纖維膜過濾后高溫滅菌的海水，鹽度為30-35；添加權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組分后，調(diào)節(jié)pH為7.9±0.3；室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，20±3℃；日光燈管照明，光強(qiáng) 5000-7000lux，光暗比12h：12h；

用 3000-5000mL 三角燒瓶培養(yǎng)，工作體積占瓶體積的 3/5，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期藻種接種；接種密度 2×10⁴cell/mL-5×10⁴cell/mL ；每天搖瓶6次；藻細(xì)胞密度達(dá)2×10⁵cell/mL-3×10⁵cell/mL，轉(zhuǎn)入下一階段培養(yǎng)；

第二階段：礦泉水桶培養(yǎng)；使用18L礦泉水桶培養(yǎng)，用次氯酸鈉消毒海水的方法消毒礦泉水桶；消毒方法為每立方米海水中加入含有效氯 20 毫克/千克的次氯酸鈉，將添加次氯酸鈉后的滅菌海水加入礦泉水桶中，充氣 30分鐘，停氣，經(jīng) 3-5 小時(shí)消毒后，用滅菌后的海水潤(rùn)洗3遍，測(cè)定無余氯存在即可使用；

海水為經(jīng)0.45μm纖維膜過濾后滅菌的海水，鹽度為30-35，添加8L培養(yǎng)基組分后，瓶口用滅菌封口膜封口；導(dǎo)入氣石充含5%二氧化碳的壓縮空氣保持pH為7.9±0.3，室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫20±3℃，雙側(cè)連續(xù)光照6000±1000LUX，光照時(shí)間15h:9h；接種密度 2×10³cell/mL-3×10³cell/mL；每隔三天添加5L培養(yǎng)液，培養(yǎng)7-9天，藻液呈棕黃色，收集5L左右培養(yǎng)液；并繼續(xù)每隔三天添加5L培養(yǎng)液，保持密封，即可循環(huán)培養(yǎng)，不斷收集。