[發明專利]一種人結腸癌干細胞的制備方法及其應用有效
| 申請號： | 201710037582.4 | 申請日： | 2017-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN108330148B | 公開（公告）日： | 2020-11-10 |
| 發明（設計）人： | 馬永;曹锫沛;陳晨 | 申請（專利權）人： | 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;G01N33/68;G01N33/569 |
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| 地址： | 213125 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 結腸癌 干細胞 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種人結腸癌干細胞的重編程方法，
包括如下步驟：
步驟1、取人結腸癌細胞SW480培養，再以表達Oct4，Sox2和Klf4三種轉錄因子的慢病毒感染細胞；
步驟2、以增殖培養基培養；
步驟3、再以誘導培養基培養，待充分重編程后，傳代純化細胞；
步驟4、繼續擴大培養并進行細胞分選即得到目的腫瘤干細胞iCSC，所述細胞分選以CD26為分選標志。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述人結腸癌干細胞的重編程方法，包括如下步驟：
步驟1、取SW480細胞培養，待細胞長滿后，消化細胞并計數，以表達Klf4、Oct4和Sox2的慢病毒以感染復數為20的比例感染細胞，接種到新的培養皿中；以增殖培養基培養；
步驟2、24h后更換新鮮的誘導培養基，繼續培養10-15天，每2天換液；
步驟3、將細胞消化，并通過0.05%胰酶將克隆球先消化下來，再消化成單細胞，接種到新的培養皿中，用誘導培養基培養，每2-3天換液；
步驟4、待其長滿后，以CD26為分選標志、利用流式細胞術分選目的細胞。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟1中感染后細胞的接種密度為2×103個/cm2。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟4具體包括如下步驟：
（a）將細胞充分消化成單細胞，將CD26單抗與細胞共孵育30分鐘；
（b）利用流式細胞儀分選細胞；
（c）分選后的細胞在增殖培養基中培養，即可得到所需的目的細胞。
5.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：所述增殖培養基為含有15%(v/v)FBS、100 U/mL的青霉素、100 μg/mL的鏈霉素和2mM的L-谷氨酰胺的DMEM培養基。
6.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：所述的誘導培養基為含有10%(v/v)FBS, 2μg/mL DOX 的DMEM培養基。
7.如權利要求1所述方法獲得的人結腸癌干細胞在抗腫瘤藥物體外藥效篩選模型中的應用。
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