[發明專利]一種提高米曲霉發酵淀粉合成L-蘋果酸的方法

有效

• 申請號: 201710036762.0
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106591158B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;劉晶晶;向玉;堵國成;李江華;房峻
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12P7/42;C12P7/46;C12R1/69
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

1.一種基因工程菌，其特征在于，以米曲霉A.oryzae PN5為宿主，共表達編碼淀粉酶的基因amyB和編碼葡萄糖苷酶的基因agdA。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因amyB是NCBI Gene ID為5996200的基因，所述基因agdA是NCBI Gene ID為5992274的基因。

3.根據權利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，以pBg32為表達載體，以淀粉誘導型強啟動子PamyB表達基因amyB，以PagdA表達基因agdA。

4.根據權利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，以過表達了葡萄糖淀粉酶基因glaA的米曲霉為宿主。

5.構建權利要求2所述基因工程菌的方法，其特征在于，將Gene ID為5996200的基因amyB、Gene ID為5992274的基因agdA與載體連接，轉化至米曲霉細胞中。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述載體為pBg32。

7.一種以淀粉為底物生產L-蘋果酸的方法，所述方法是將權利要求1所述基因工程菌接種至發酵培養基中，30～34℃，200～250rpm發酵48～96h。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，先將32～34℃恒溫培養3-7天的孢子接至種子培養基中，使得孢子終濃度≥1.5×10⁶個/mL，30～34℃，200～250rpm培養12～16h，再按體積5～10％的接種量轉接至發酵培養基中，30～34℃，200rpm培養48～96h。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基每L含有：可溶性淀粉100g，胰蛋白胨12g，K₂HPO₄ 0.15g，KH₂PO₄ 0.15g，MgSO4.7H₂0 0.1g，CaCl₂.H₂0 0.1g，CaCO₃90g，0.005g NaCl，0.005g FeSO₄.7H₂0。

10.權利要求1-2,4任一所述基因工程菌在發酵領域制備L-蘋果酸方面的應用。