[發(fā)明專利]一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基以及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710035052.6
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106635965A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳志勝;趙姝燦;張曉芳;李東升
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44100
• 代理人: 許英偉

1.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基，其特征在于，包括KO-DMEM、B-27supplement、NAA、nucleosides、GlutaMAX II、β-巰基乙醇、卵清蛋白、OVT、肝素鈉、Activin A、TGF-β1、BMP4、FGF-2、IGF-1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基，其特征在于，以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加20-30ng/ml的BMP4、20-30ng/ml的TGF-β1、20-30ng/ml的Activin A、5-20ng/ml的OVT、1-5ng/ml的FGF-2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基，其特征在于，以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還包括其1-2％的50X B-27supplement、1％的100X NAA、1％的100X nucleosides、2.0mM GlutaMAX II、0.1mMβ-巰基乙醇、1-2％卵清蛋白、0.5％-2％肝素鈉，均為體積比。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基，其特征在于，還含有以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，體積比0.5％-2％的三抗，所述三抗由青霉素、鏈霉素、兩性霉素B組成。

5.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采集的14HH雞胚血液置入含有cPGCs完全培養(yǎng)液的培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，原代培養(yǎng)10-15d即可純化細(xì)胞；

(2)將純化后cPGCs細(xì)胞重新置入cPGCs完全培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增；

(3)對體外培養(yǎng)擴(kuò)增的cPGCs進(jìn)行計(jì)數(shù)、間接免疫熒光檢測，包括SSEA-1和DAZL表面標(biāo)記。