[發(fā)明專利]一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基以及其使用方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710035052.6 | 申請日: | 2017-01-18 |
| 公開(公告)號: | CN106635965A | 公開(公告)日: | 2017-05-10 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 陳志勝;趙姝燦;張曉芳;李東升 | 申請(專利權(quán))人: | 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院 |
| 主分類號: | C12N5/0735 | 分類號: | C12N5/0735 |
| 代理公司: | 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44100 | 代理人: | 許英偉 |
| 地址: | 528000 廣*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 培養(yǎng) cpgcs 完全 培養(yǎng)基 及其 使用方法 | ||
1.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,包括KO-DMEM、B-27supplement、NAA、nucleosides、GlutaMAX II、β-巰基乙醇、卵清蛋白、OVT、肝素鈉、Activin A、TGF-β1、BMP4、FGF-2、IGF-1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,并添加20-30ng/ml的BMP4、20-30ng/ml的TGF-β1、20-30ng/ml的Activin A、5-20ng/ml的OVT、1-5ng/ml的FGF-2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,還包括其1-2%的50X B-27supplement、1%的100X NAA、1%的100X nucleosides、2.0mM GlutaMAX II、0.1mMβ-巰基乙醇、1-2%卵清蛋白、0.5%-2%肝素鈉,均為體積比。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,還含有以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,體積比0.5%-2%的三抗,所述三抗由青霉素、鏈霉素、兩性霉素B組成。
5.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基的使用方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)采集的14HH雞胚血液置入含有cPGCs完全培養(yǎng)液的培養(yǎng)體系中培養(yǎng),原代培養(yǎng)10-15d即可純化細(xì)胞;
(2)將純化后cPGCs細(xì)胞重新置入cPGCs完全培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增;
(3)對體外培養(yǎng)擴(kuò)增的cPGCs進(jìn)行計(jì)數(shù)、間接免疫熒光檢測,包括SSEA-1和DAZL表面標(biāo)記。
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