[發(fā)明專利]一種東方鲀屬魚類雌雄性別的分子鑒別方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710033765.9
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN106755473A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周勤;劉永新;張紅濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院;中國水產(chǎn)科學(xué)研究院北戴河中心實(shí)驗(yàn)站
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速檢測東方鲀屬魚類性別的引物，其特征在于：所述引物包括兩條正向引物和一條反向引物，序列如下：

上游引物ZQ_F3：5’-TCCTGGAAGGCTCTGTCC-3’；

上游引物ZQ_F4：5’-TCCTGGAAGGCTCTGTCG-3’；

下游引物ZQ_R：5′-AGTGTTGCGGTATGTAAGG-3′。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述引物，其特征在于：所述東方鲀屬魚類為紅鰭東方鲀、菊黃東方鲀或暗紋東方鲀。

3.一種快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：提取待測東方鲀屬魚的DNA樣品；使用如權(quán)利要求1所述的引物，對DNA樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中，分別使用上游引物ZQ_F3和下游引物ZQ_R的引物組、上游引物ZQ_F4和下游引物ZQ_R的引物組對DNA樣品進(jìn)行擴(kuò)增；將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳測試，通過電泳測試結(jié)果判斷所述東方鲀魚性別。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于：當(dāng)引物ZQ_F3和引物ZQ_R有PCR擴(kuò)增結(jié)果，而引物ZQ_F4和引物ZQ_R沒有PCR擴(kuò)增結(jié)果，表明該樣本為XX雌魚；當(dāng)引物ZQ_F4和引物ZQ_R有PCR擴(kuò)增結(jié)果，而引物ZQ_F3和引物ZQ_R沒有PCR擴(kuò)增結(jié)果，表明該樣本為YY超雄魚；當(dāng)引物ZQ_F4和引物ZQ_R，引物ZQ_F3和引物ZQ_R引物都有擴(kuò)增，表明樣本為XY雄魚。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于：所述方法PCR擴(kuò)增的條件為：PCR反應(yīng)體系20μL，所述體系包括模板DNA 25ng、10×Buffer 2μL、10mM dNTPs 0.4μL、10μM F-primer 0.25μL、10μM R-primer 0.25μL、5U/μLTaq酶0.2μL；94℃預(yù)變性5min；94℃變性35s，TM退火35s，72℃延伸40s，循環(huán)33次；72℃延伸5min；4℃保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求3至5所述的快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于所述方法PCR擴(kuò)增退火溫度為55℃至75℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求3至5所述的快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于所述方法PCR擴(kuò)增退火溫度可以為56.7℃、59℃、62.3℃、65.9℃、67.7℃、69.5℃或72.2℃。

8.根據(jù)權(quán)利要求3至5所述的快速檢測東方鲀屬魚類性別的方法，其特征在于所述方法PCR擴(kuò)增退火溫度為65℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求3-8所述的任一方法，其特征在于，所述東方鲀屬魚類為紅鰭東方鲀、菊黃東方鲀或暗紋東方鲀。