[發明專利]建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法及應用

在審

• 申請號: 201710029029.6
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN107058384A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 王寧;王雅杰;熊安穩;王一然;劉傳;吳家雪
• 申請（專利權）人: 上海長海醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，構建與人CHEK2Y390C相對應的位點的相應動物的打靶載體，

步驟二，通過電轉，將打靶載體轉入ES細胞中；

步驟三，篩選正確同源重組的ES克隆，

步驟四，將ES進行囊胚注射，得到嵌合體動物，再經過繁育和純化后獲得可穩定遺傳的Y390C動物模型。

2.如權利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

步驟一中，與人CHEK2Y390C對應的小鼠位點為Y394C。

3.如權利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

步驟二中，ES細胞為B6/BLU ES細胞系。

4.如權利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

通過長片段PCR及Southern blot篩選出中靶克隆。

5.如權利要求4所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

其中，所述長片段PCR的5’端引物是：

CHEK2-5F2:GAGGTCTGTTTCTTACCTGC

ES-1R3:AAGGGTTATTGAATATGATCGGA

所述長片段PCR的3’端引物是：

CHEK2-3R1:TCTGAAGAGATGAATGTGTG

ES-2F4:GCATCGCATTGTCTGAGTAGGTG。

6.如權利要求2所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

步驟四中，囊胚注射后首先選取高嵌合率的嵌合體小鼠。

7.如權利要求6所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

步驟四中，將嵌合體小鼠與B6小鼠進行繁育，得到的F1代小鼠用PCR測序鑒定基因型。

8.如權利要求7所述的建立乳腺癌易感基因突變動物模型的方法，其特征在于：

將KIn的雜合小鼠與全身表達Cre的品系交配，去除Neo得到KI模型；將KI/wt小鼠互配得到純合子小鼠。

9.權利要求8中的純合子小鼠在篩選乳腺癌藥物中的應用。