[發明專利]靶向修飾的負載阿霉素的磁性納米顆粒及制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710027638.8
• 申請日: 2017-01-15
• 公開（公告）號: CN106729773A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 姜金蘭;牟旭鵬;張福強
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K49/18
• 分類號: A61K49/18;A61K49/16;A61K49/12;A61K41/00;A61K47/68;A61K47/69;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 魏征驥

1.一種靶向修飾的負載阿霉素的磁性納米顆粒，其特征在于：由多巴胺作為外殼包裹形成的磁性Fe₃O₄納米顆粒作為核心，和在其表面通過1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及N-羥基琥珀酰亞胺共價偶聯的EGFR抗體,以及通過非共價結合到納米顆粒表面的阿霉素構成。

2.根據權利要求1所述的一種靶向修飾的負載阿霉素的磁性納米顆粒，其特征在于：粒徑為95～105nm。

3.如權利要求1所述的一種靶向修飾的負載阿霉素的磁性納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括下列步驟：

(1)將2mmol的FeCl₃溶解在4mL乙二醇和16mL一羧二乙二醇的混合溶液中，攪拌0.5-1h后，在上述溶液中加入2g的聚乙烯吡咯烷酮，將溶液加熱到120℃得到透明的黃色溶液，1-2h后，停止加熱并加入1.5g乙酸鈉，繼續攪拌0.5-1h，將溶液轉移到25mL的反應釜中，將反應釜密封并加熱到200℃，繼續反應12-16h后，停止加熱并將反應釜冷卻至室溫，得到的Fe₃O₄納米簇用乙醇和水各洗3遍，Tris緩沖液溶解；

(2)將步驟(1)所制的含Fe₃O₄納米簇的Tris緩沖液調節pH至8.5，緩慢加入0.03M多巴胺溶液，在室溫下反應3-6h直至顏色變黑，離心、去離子水洗滌2-3次，取沉淀物50-60℃真空干燥得到多巴胺包裹的Fe₃O₄@PDA納米粒子；

(3)取10mg步驟(2)制備的Fe₃O₄@PDA納米粒子及30-60mg NH₂-PEG-COOH溶于50-100mL，0.01M,pH 8.1，Tris緩沖液中，劇烈震搖12-24h，離心、去離子水洗滌2-3次，取沉淀物50-60℃真空干燥得到PEG偶聯的Fe₃O₄@PDA-PEG納米粒子；

(4)用PBS緩沖液溶解步驟(3)所得到的Fe₃O₄@PDA-PEG納米粒子使納米粒子濃度為1mg/mL，并調節pH為5.0，向此溶液中加入5mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和12.5mmol的N-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)，室溫震蕩0.5-1h；在反應體系中加入EGFR抗體使抗體終濃度為50ug/mL，混合均勻并調節pH至7.0-7.5，室溫振蕩反應4-12h，反應結束后用PBS緩沖液離心洗滌2-3次，得到所述EGFR抗體修飾的納米顆粒Fe₃O₄@PDA-PEG-EGFR，得到的Fe₃O₄@PDA-PEG-EGFR納米顆粒可加入PBS緩沖液溶解后置于4℃冰箱內保存待用；

(5)取1mg上述步驟(4)制備的Fe₃O₄@PDA-PEG-EGFR溶解于0.5-1mL 10×Tris緩沖液中與2mL DOX溶液1mg/mL混合，避光震搖12-24h后離心、去離子水洗滌2-3次，得到Fe₃O₄@PDA-PEG-EGFR-DOX納米粒子。

4.如權利要求1所述的靶向修飾的負載阿霉素的磁性納米顆粒在制備結腸癌靶向的光熱治療劑中的應用。