[發(fā)明專利]尖孢鐮刀菌株及其在制備3β，7α，15α-三羥基雄甾-5-烯-17-酮中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710027452.2
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106591155B
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 單麗紅;劉宏民;姜冬冬;趙沙沙;喬星;張璐佳
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/12;C12P33/06;C12R1/77
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

本發(fā)明公開了一株具有立體選擇性羥化酶活性的尖孢鐮刀菌株（Fusarium oxysporum LZ0202），已于2013年3月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC 7276，屬于生物催化技術(shù)領(lǐng)域。該菌株能對去氫表雄酮的7α，15α位置進(jìn)行羥基化。通過尖孢鐮刀菌對去氫表雄酮進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化得到7α，15α?二羥基雄烯醇酮，轉(zhuǎn)化率為69.1%以上，該化合物是合成第四代口服避孕藥屈螺酮的重要中間體，其收率決定著終產(chǎn)物屈螺酮的總收率。對有效地利用寶貴的皂素資源，開發(fā)高端激素藥物，促進(jìn)我國皮質(zhì)激素制藥工業(yè)的發(fā)展具有深遠(yuǎn)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物菌株、其培養(yǎng)方法及其在甾體生物轉(zhuǎn)化上的應(yīng)用，尤其涉及一株具有立體選擇性羥化去氫表雄酮(Dihydroepiandroe，DHEA)的霉菌及優(yōu)化后的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基組成和轉(zhuǎn)化條件，屬于生物催化技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

屈螺酮(Drospirenone)具有孕激素活性,同時又具有抗雄性激素的作用，主要用于女性口服避孕藥和激素替代治療藥物。屈螺酮作為目前最好的第四代口服避孕藥物之一，其具有的抗鹽皮質(zhì)激素活性可減少體液潴留，這使其在表現(xiàn)出良好避孕效果的同時，還具有降血壓，降低體重等優(yōu)點。并且調(diào)查表明，使用屈螺酮還有改善皮膚問題、緩解女性經(jīng)前期綜合癥(PMS)、預(yù)防婦女骨質(zhì)疏松等作用。目前，屈螺酮的復(fù)方口服避孕藥Yasmin(優(yōu)思明)已經(jīng)在多個國家上市，是世界上使用量最大的口服避孕藥物。

屈螺酮的合成方法有多種,可分為有微生物參與的合成路線及無微生物參與的純化學(xué)路線兩類，有微生物參與的路線無論在立體選擇性方面還是總收率方面均明顯優(yōu)于純化學(xué)路線，其中以3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮作為中間體的路線總收率較佳。3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮用化學(xué)合成法難以得到，利用微生物轉(zhuǎn)化法則具有很大優(yōu)勢。

甾體微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是利用微生物的酶對甾體底物的某一部位進(jìn)行特定的化學(xué)反應(yīng)來獲得一定的產(chǎn)物，其在甾體藥物生產(chǎn)中占有重要地位，常常被用于某些甾體激素類藥物中間體的合成。與化學(xué)方法相比，甾體微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)具有立體專一性強(qiáng)，收率高，副產(chǎn)物少，反應(yīng)條件溫和及價格低廉等優(yōu)點。

本發(fā)明篩選到一株對去氫表雄酮具有羥基化作用的霉菌，目前國內(nèi)外均未見其用于轉(zhuǎn)化DHEA獲得3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是為了提供一株尖孢鐮刀菌株，將其用于3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮的制備，在3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮制備過程中實現(xiàn)步驟簡單、成本低廉、環(huán)境友好、產(chǎn)率高等優(yōu)勢；另一目的在于提供利用該菌株制備3β，7α，15α‐三羥基雄甾‐5‐烯‐17‐酮的方法。

為達(dá)到發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

所述菌株為一株尖孢鐮刀菌株(Fusarium oxysporum LZ0202)，該菌株已于2013年3月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為：CGMCCNo.7276。該菌株能產(chǎn)生具有立體選擇性的羥化酶，其特征在于可在去氫表雄酮的7α，15α等位置選擇性地進(jìn)行羥基化。

該菌株形態(tài)特征：在酵母膏蛋白胨培養(yǎng)基上，菌落呈突起絮狀，高3‐5mm，菌落呈粉白色或淺粉色。顯微鏡下可見小型分生孢子著生于單生瓶梗上，常在瓶梗頂端聚成球團(tuán)，單胞，卵形；大型分生孢子鐮刀形，少許彎曲。