[發明專利]一種構建肝臟人源化小鼠模型的方法

在審

• 申請號: 201710027143.5
• 申請日: 2017-01-15
• 公開（公告）號: CN108310368A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 周曉輝;任曉楠;任蓉蓉;楊華;袁夢嬌
• 申請（專利權）人: 上海市公共衛生臨床中心
• 主分類號: A61K38/43
• 分類號: A61K38/43;C12N5/071;A61D7/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬于生物醫學領域，涉及一種人源化肝臟嵌合小鼠模型的構建方法，其中包括，構建具有可誘導型肝損與免疫缺陷表型的ADSB小鼠，并通過白喉毒素干預使所述實驗小鼠形成肝損后，進行人肝細胞嵌合建得人肝嵌合小鼠模型；本發明方法構建了具有可誘導型肝損與免疫缺陷表型的ADSB小鼠，構建獲得的人源化肝臟小鼠模型可為肝移植研究提供可行的動物模型支撐，可深入探討肝細胞移植和肝臟再生等機制，并可用于人類病毒性肝炎如HBV、HCV等感染相關的基礎研究，對相關治療藥物研發與評估具有重要的理論和應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及實驗動物模型的建立方法，具體涉及一種構建人肝嵌合小鼠模型的方法，尤其涉及一種可誘導的特異性肝臟損傷后進行人肝嵌合模型的構建方法。

背景技術

資料公開了肝臟疾病已成為對人類威脅最大的疾病之一，除病毒性肝炎外，肝臟疾病中肝硬化、肝癌等的危害均相當嚴重；據統計，目前，中國每年用于肝炎和肝病的直接醫療費用高達1000多億元人民幣。臨床對于肝臟疾病的干預措施中，肝臟移植手術對于解決肝臟系統疾病和肝臟代謝紊亂等漸成為一種非常重要的干預手段之一。

業內共識，人源化肝、免疫系統的雙嵌合小鼠模型可用于研究相關病毒復制和免疫反應情況，其可為HBV、HCV感染等重大傳染性肝病的研究，以及可為脂肪肝、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的研究提供人源化研究平臺。

有關研究表明，對于乙型肝炎病毒而言，由于其特殊的嗜人肝性，不易在其他動物模型重現其感染過程，因此，目前缺乏有效的小動物模型，建立能有效模擬人體HBV感染及免疫應答的實驗動物模型正成為當前深入推進HBV研究的重大而緊迫的需求。

基于現有技術的現狀，本申請的發明人擬提供一種構建肝臟人源化小鼠模型的方法，尤其是可誘導的特異性肝臟損傷后進行人肝嵌合模型的構建方法，從而獲得人肝嵌合小鼠模型。為重大傳染性肝病以及為肝癌等肝臟疾病提供人源化研究平臺。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的缺陷，提供一種構建肝臟人源化小鼠模型的方法，尤其是可誘導的特異性肝臟損傷后進行人肝嵌合模型的構建方法，從而獲得人肝嵌合小鼠模型；該模型可用于HBV、HCV感染等重大傳染性肝病的研究以及為脂肪肝、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的研究提供人源化研究平臺。

本發明提供了一種人源化肝臟嵌合小鼠模型的構建方法，其中包括，構建具有可誘導型肝損與免疫缺陷表型的ADSB小鼠，并通過白喉毒素干預使所述實驗小鼠形成肝損后，進行人肝細胞嵌合建得人肝嵌合小鼠模型；本發明方法構建獲得的人源化肝臟小鼠模型可為肝移植研究提供可行的動物模型支撐，可深入探討肝細胞移植和肝臟再生等機制，并可用于人類病毒性肝炎如HBV、HCV等感染相關的基礎研究，對相關治療藥物研發與評估具有重要的理論和應用價值。

本發明基于業內知悉的有關特殊品系動物的出現以及依托它們構建的人類重大疾病動物模型，是感染性疾病轉化醫學研究的必需工具的基礎，在獲得的可誘導的特異性肝臟損傷小鼠模型(專利申請號201510153724.4)基礎上進一步優化為Alb-cre/DTR/SCID-beige(Alb-cre：肝臟特異性表達Cre酶；DTR：條件性轉入人白喉毒素受體基因，其表達受Cre/LoxP系統控制；SCID-beige：免疫缺陷小鼠)小鼠模型，簡稱為ADSB小鼠；本發明方法中采用白喉毒素干預ADSB小鼠致使該ADSB小鼠發生肝臟損傷，繼而對所述的肝臟損傷的ADSB小鼠進行人肝細胞移植，一月后觀察檢測到人肝細胞已成功在小鼠體內定植，構建獲得的人源化肝臟小鼠模型。

具體而言，本發明的一種人源化肝嵌合小鼠模型的構建方法，其特征在于，基于ADSB三轉基因小鼠，在特異性肝臟損傷的基礎上進行人肝細胞移植，其包括步驟：

1.ADSB三轉基因小鼠的獲得、繁育和鑒定

將Alb-cre與DTR小鼠雜交后獲得Alb-cre/DTR雙轉基因小鼠，再將其與SCID-beige小鼠雜交，獲得ADSB三轉基因小鼠；