[發(fā)明專利]一種構(gòu)建肝臟人源化小鼠模型的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710027143.5
• 申請日: 2017-01-15
• 公開（公告）號: CN108310368A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周曉輝;任曉楠;任蓉蓉;楊華;袁夢嬌
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市公共衛(wèi)生臨床中心
• 主分類號: A61K38/43
• 分類號: A61K38/43;C12N5/071;A61D7/00
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，其包括，構(gòu)建具有可誘導(dǎo)型肝損與免疫缺陷表型的ADSB小鼠，并通過白喉毒素干預(yù)后，進行人肝細胞嵌合建得人肝嵌合小鼠模型；其包括步驟：

1)ADSB三轉(zhuǎn)基因小鼠的獲得、繁育和鑒定

將Alb-cre與DTR小鼠雜交后獲得Alb-cre/DTR雙轉(zhuǎn)基因小鼠，再將其與SCID-beige小鼠雜交，獲得ADSB三轉(zhuǎn)基因小鼠；

2)建立肝臟損傷模型，

對ADSB小鼠進行白喉毒素干預(yù)得肝損造模；

3)建立人肝細胞嵌合小鼠模型。

2.按權(quán)利要求1所述的人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述得三轉(zhuǎn)基因小鼠為Alb-cre/DTR/SCID-beige三轉(zhuǎn)基因小鼠(ADSB小鼠)。

3.按權(quán)利要求1所述的人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，對獲得的ADSB三轉(zhuǎn)基因小鼠，通過PCR和流式的方法對雜交產(chǎn)生的子代進行基因定型，確定其含有所述的三種基因型。

4.按權(quán)利要求1所述的人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，對ADSB小鼠進行白喉毒素干預(yù)得肝損造模中，造模所用白喉毒素劑量為2～5ng/g小鼠體重。

5.按權(quán)利要求1或4所述的人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，對ADSB小鼠進行白喉毒素干預(yù)得肝損造模中，以同周齡C57BL/6小鼠作為對照；檢測肝損相關(guān)生化指標(biāo)的變化，以評價肝損造模成功與否；所述的肝損相關(guān)生化指標(biāo)ALT值與對照C57BL/6小鼠相比顯著升高者，確定為肝損成功模型。

6.按權(quán)利要求1所述的人源化肝臟小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，建立人肝細胞嵌合小鼠模型中，將0.5-1×10⁶人肝細胞移植至所述的肝損第二天的小鼠，移植四周后ELISA檢測小鼠血清人白蛋白的表達，表達較對照C57BL/6小鼠顯著升高者，確定為人肝嵌合小鼠模型。