[發明專利]一種高比活內切木聚糖酶NPWXynB及其基因和應用

有效

• 申請號: 201710027083.7
• 申請日: 2017-01-15
• 公開（公告）號: CN106834255B
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 李陽源;王建榮;周銀華;夏雨;楊玲
• 申請（專利權）人: 廣東溢多利生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 11318 北京法思騰知識產權代理有限公司
• 代理人: 高宇

1.一種高比活內切木聚糖酶NPWXynB，其特征在于，其氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示。

2.一種高比活內切木聚糖酶基因NPWXynB，其特征在于，編碼權利要求1所述的高比活內切木聚糖酶NPWXynB。

3.如權利要求2所述的高比活內切木聚糖酶基因NPWXynB，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種提高內切木聚糖酶XynB比活的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：定點突變氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的內切木聚糖酶XynB的氨基酸位點：第58位用F替代Y，第78位用Y替代M，第94位用S替代Y，第143位用L替代V，第145位用R替代E，以及第182位用R替代D。

5.包含權利要求2或3所述的高比活內切木聚糖酶基因NPWXynB的重組載體。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體為pPICzαA-NPWXynB或pPIC9K-NPWXynB，其中，將權利要求2所述的高比活內切木聚糖酶基因NPWXynB連接到酵母表達載體pPICzαA和pPIC9K上的EcoR I和Not I限制性酶切位點之間，使該核苷酸序列位于AOX1啟動子的下游并受其調控，分別得到重組重組載體pPICzαA-NPWXynB和pPIC9K-NPWXynB。

7.包含權利要求2或3所述的高比活內切木聚糖酶基因NPWXynB的重組菌株。

8.一種表達權利要求1所的述高比活內切木聚糖酶NPWXynB的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)用權利要求6所述的重組載體轉化宿主細胞，得到重組菌株；

2)重組菌株進行發酵，誘導重組內切木聚糖酶的表達；

3)發酵結束后，回收并純化所表達的高比活內切木聚糖酶NPWXynB。