[發(fā)明專利]鴨病毒性肝炎二價蛋黃抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710026081.6
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN106854647B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N15/41;C07K14/085;C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種鴨病毒性肝炎3型病毒株，其中所述的鴨病毒性肝炎3型病毒株為鴨病毒性肝炎病毒SD1株，所述SD1株保藏地址為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO.V201225。

2.一種鴨病毒性肝炎3型病毒株VP1的DNA序列，其中所述DNA序列如SEQ ID No.1所示。

3.一種鴨病毒性肝炎3型病毒VP1抗原蛋白，其中所述VP1抗原蛋白的氨基酸序列如SEQID No.2所示，具有49-T、196-N、207-E三個氨基酸取代位點和197-Q、198-S、199-D三個共有位點。

4.一種鴨病毒性肝炎二價蛋黃抗體，其特征在于，所述二價蛋黃抗體包含鴨病毒性肝炎DHAV-1型DRL-62株和如權利要求1所述的鴨病毒性肝炎DHAV-3型SD1株制備的蛋黃抗體，所述DHAV-1型毒株DRL-62由美國菌種保藏中心ATCC保藏，保藏編號為VR-1313。

5.一種鴨病毒性肝炎二價蛋黃抗體的制備方法，所述制備方法包括：

(1)采用權利要求4中所述的鴨病毒性肝炎DHAV-1型毒株DRL-62和DHAV-3型毒株SD1分別接種9日齡SPF雞胚和10日齡易感鴨胚，然后收獲尿囊液，將所述收獲的病毒液甲醛滅活，按比例混合，并制備免疫用滅活苗；

(2)使用所述制備的免疫用滅活苗免疫產(chǎn)蛋雞，免疫后抽樣測定雞高免蛋黃中抗DHAV-1型、DHAV-3型抗原抗體中和效價≥1∶8192，之后收集所述雞的高免蛋；

(3)將所述高免蛋蛋殼消毒，收集蛋黃，所述蛋黃加入等體積蒸餾水，攪拌混勻，低溫巴氏滅活；酸化蒸餾水法提純、辛酸法提純；微濾，超濾。

6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其中，所述低溫巴氏滅活條件為62.5℃加熱滅活30min。

7.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其中，所述酸化蒸餾水法提純步驟為：先在隔層反應罐中加入相當于所述蛋黃6倍體積的滅菌蒸餾水，所述蒸餾水pH值為4.2，并降溫至4℃，然后，將滅活的所述蛋黃液加入，攪拌，4℃靜置4h，離心分離上清液；

所述辛酸法提純步驟為：按所述上清液總量的0.2％體積加入辛酸，攪拌，室溫放置4h，過濾至澄清，再按所述濾液總量的0.1％加入飽和甲醛溶液，攪拌，室溫放置24h。

8.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其中，所述微濾使用0.22μm微孔濾芯過濾除菌，所述超濾用截留分子量為1000KDa的超濾膜過濾除病毒。

9.根據(jù)權利要求4所述的鴨病毒性肝炎二價蛋黃抗體在制備預防和治療鴨病毒性肝炎的藥物中的應用。

10.一種預防和治療鴨病毒性肝炎的疫苗組合物，所述疫苗組合物包括權利要求1所述的鴨病毒性肝炎DHAV-3型SD1株制備的抗原以及藥學上可以接受的載體。