[發明專利]一種棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白基因及其應用在審
| 申請號： | 201710025912.8 | 申請日： | 2017-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN106754999A | 公開（公告）日： | 2017-05-31 |
| 發明（設計）人： | 高俊山;許磊;陳文;孟艷;蔡永萍;林毅 | 申請（專利權）人： | 安徽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/54 | 分類號： | C12N15/54;C12N15/82;C12N1/21;C12N9/10;A01H5/00 |
| 代理公司： | 安徽匯樸律師事務所34116 | 代理人： | 洪玲 |
| 地址： | 230036 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 棕色 棉纖維 花青素 轉運 相關 gst 蛋白 基因 及其 應用 | ||
1.一種棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白基因，其特征在于，所述基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.一種如權利要求1所述的棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白基因在培育棕色棉品種中的應用。
3.一種棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白，其特征在于，所述蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
4.一種植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體含有如權利要求1所述的棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白基因。
5.根據權利要求4所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體為含有上述基因的pCambia1301a載體。
6.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有如權利要求4、5所述的植物表達載體，或其基因組中整合有外源的如權利要求1所述的棕色棉纖維原花青素轉運相關的GST蛋白基因。
7.根據權利要求5所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為含有如權利要求4、5所述的植物表達載體或整合有外源的如權利要求1所述基因的農桿菌細胞。
8.一種制備轉基因植物的方法，所述植物為擬南芥，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)制備侵染液：將如權利要求6、7所述的宿主細胞活化后，用緩沖液重懸，獲得侵染液，所述緩沖液為含有質量比為5％的蔗糖和0.02％的Silwet L-77的1/2MS液體培養基，所述侵染液的OD600值為0.8；
(2)將預轉化的擬南芥苗的果莢和已開放的花朵全部剪掉，只留花蕾，將全部花蕾倒置浸在步驟(1)的侵染液中45s，再置于黑暗處培養一天，然后置于光照培養箱中繼續培養，并控制光照時間為16h/天；
(3)每隔1周重復步驟(2)一次，直至種子成熟，獲得T0代種子；
(4)將T0代種子消毒后接種指含有50mg/L潮霉素的MS固體篩選培養基中，置于光照培養箱中培養，并控制光照時間為16h/天，至幼苗長出4-6片蓮座后，移入營養土中繼續培養并收獲T1代種子；
(5)重復步驟(4)獲得穩定遺傳的轉基因植株及其后代。
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