[發(fā)明專利]一種滋養(yǎng)細(xì)胞刺激NK細(xì)胞擴(kuò)增的方法和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710025596.4
• 申請(qǐng)日: 2017-01-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108300697A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃飛;何鳳;趙曉楠;金濤;王海鷹;史子嘯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海恒潤(rùn)達(dá)生生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基因工程細(xì)胞，其特征在于，所述基因工程細(xì)胞K562-APC3-mbIL21，其細(xì)胞膜表面穩(wěn)定表達(dá)CD64、CD86、41BBL和膜固定IL-21。

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建K562-APC3-mbIL21所編碼的氨基酸序列，其特征在于

所述CD64的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述CD86的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述41BBL的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述mbIL21的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

3.如權(quán)利要求2所述的多核苷酸序列，其特征在于

所述CD64的多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述CD86的多核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

所述41BBL多核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；

所述mbIL21多核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基因工程細(xì)胞，其特征在于，所述基因工程細(xì)胞為K562-APC3-mbIL21細(xì)胞。

5.權(quán)利要求1所述的基因工程細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建分別表達(dá)CD64、CD86、41BBL和mbIL-21的慢病毒載體；

(2)CD64、CD86、41BBL三個(gè)慢病毒共轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞，流式細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)，獲得CD64、CD86、41BBL穩(wěn)定表達(dá)K562細(xì)胞在此基礎(chǔ)上導(dǎo)入細(xì)胞膜表面穩(wěn)定表達(dá)的IL-21，建立K562-APC3-mbIL21。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因工程細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述基因工程細(xì)胞為K562-APC3-mbIL21細(xì)胞。

7.權(quán)利要求1或4所述的基因工程細(xì)胞在NK細(xì)胞擴(kuò)增中的應(yīng)用。

8.一種NK細(xì)胞擴(kuò)增方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1所述基因工程細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建CD64、CD86、41BBL和mbIL-21表達(dá)的慢病毒載體；

(2)CD64、CD86、41BBL三個(gè)慢病毒共轉(zhuǎn)染相應(yīng)細(xì)胞，流式細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)，獲得CD64、CD86、41BBL穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞在此基礎(chǔ)上導(dǎo)入細(xì)胞膜表面穩(wěn)定表達(dá)的IL-21，建立K562-APC3-mbIL21；

(3)致死性照射或絲裂霉素處理步驟(2)獲得的基因工程細(xì)胞，按1:2與分選后的NK細(xì)胞混合，在NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)液中共培育；

(4)每周重復(fù)刺激1次，連續(xù)刺激2周，以獲得足夠量的NK細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種NK細(xì)胞擴(kuò)增方法，其特征在于，所述基因工程細(xì)胞為為K562-APC3-mbIL21。

10.如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的高效擴(kuò)增NK細(xì)胞的方法在細(xì)胞治療領(lǐng)域中的應(yīng)用。