[發(fā)明專利]利用通用TaqMan探針檢測SNP的方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710025277.3
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106868111B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發(fā)明（設計）人: 翟晨光;趙麗娜;盧洪
• 申請（專利權）人: 中玉金標記（北京）生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京卓孚律師事務所 11821
• 代理人: 謝夢欣;任宇

1.用于檢測基因組中的SNP或者插入或者缺失的試劑盒，所述試劑盒包含如下成分或者由如下成分組成：

（I）PCR引物組，所述引物組由以下引物構成：（1）第一正向引物，其由5’末端的第一通用尾部序列部分和3’末端的等位基因特異性序列部分構成；（2）第二正向引物，其由5’末端的第二通用尾部序列部分和3’末端的等位基因特異性序列部分構成；和（3）一條共用特異性反向引物，所述共用特異性反向引物是針對每條待擴增模板設計的特異性引物，但并非待檢測SNP或者插入或者缺失的等位基因特異性引物，所述第一通用尾部序列和第二通用尾部序列選自以下(a)至(d)組：

(a) CAAGGTGACCAAGTTCAAGGT（SEQ ID NO: 1）；

CAAGGTCGGAGTCAACGCTTA（SEQ ID NO: 2）；

(b) CTGAACTTGGTCACCTTAGGT（SEQ ID NO: 3）；

CCGTTGACTCCGACCTTCGTA（SEQ ID NO: 4）；

(c) GAAGGTGACCAAGTTCATGCT（SEQ ID NO: 5）；

GAAGGTCGGAGTCAACGGATT（SEQ ID NO: 6）；和

(d) CTACGACACCAAGTTGATGCT（SEQ ID NO: 7）；

GAACGACGAAGTGAAAGGATT（SEQ ID NO: 8）；

和

（II）通用TaqMan探針組，所述通用TaqMan探針組的組成如下：（1）第一通用TaqMan探針，其是在5’末端和3’末端分別具有報告熒光團和淬滅基團的通用寡核苷酸序列；以及（2）第二通用TaqMan探針，其是在5’末端和3’末端分別具有報告熒光團和淬滅基團的通用寡核苷酸序列，所述通用TaqMan探針組選自如下探針組(e)至(g)：

(e) 5’-FAM-GTGACCAAGTTCATGCT-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-TCGGAGTCAACGGATT-MGB-NFQ-3’；

(f) 5’-FAM-GAACTTGGTCACCTT-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-CGTTGACTCCGACCTT-MGB-NFQ-3’；和

(g) 5’-FAM-ATCAACTTGGTGTCGTA-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-CTTTCACTTCGTCGTT-MGB-NFQ-3’；

所述成分（I）和成分（II）分別在試劑盒中不同的盒中或者在同一盒中。

2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述淬滅基團連接有小溝結合物MGB基團，所述小溝結合物MGB基團選自：CC 1065類似物，偏端霉素，紡錘菌素，貝尼爾，多卡米星，噴他脒，4,6-二氨基-2-苯基吲哚，吡咯并[2,1-c][1,4]苯二氮和二氫環(huán)化吲哚卟啉三肽(DPI3)。

3.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述小溝結合物MGB基團將寡核苷酸序列的熔融溫度（Tm）提高3℃至10℃。