[發明專利]一種獲得適合高密度種植和機械化收獲的油菜材料的方法

在審

• 申請號: 201710025164.3
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106834340A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 譚小力;付正莉;黃琪;朱克明;王政;丁麗娜;曹軍;張志燕;陳克平
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適于高密度種植和機械化收獲的油菜材料的獲得方法，其特征在于，具體操作如下：

（1）采用農桿菌浸花法將激活標簽載體轉化到油菜中：

將激活標簽載體轉化到農桿菌感受態細胞中，將鑒定轉化成功的菌制備菌懸液；將目標物油菜植株上已開花的花蕾和角果減掉，然后進行浸花過程；

（2）利用綠色熒光蛋白GFP篩選油菜轉化株：

（3）采用草丁膦除草劑篩劑篩選油菜轉化株；

（4）PCR方法鑒定突變體植株：

將篩選得到的含有激活標簽載體pCB260的油菜突變體植株葉片作為實驗材料，CTAB法小量提取基因組DNA，PCR擴增激活標簽載體pCB260上的bar片段；

（5）轉化植株的表型分析，確定得到的轉化植株為適于高密度種植和機械化收獲的油菜材料。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述激活標簽載體為pCB260；所述的農桿菌感受態細胞為GV3101。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述浸花具體操作過程如下：

（1）第一次浸花：除去開放的花蕾，把整個未開放花蕾浸潤于含有重組質粒pCB260的農桿菌菌液里，輕柔地晃動菌液；浸潤完畢的花蕾套入羊皮袋內；

（2）第二次浸花：距離第一次浸花后1-2天，重復步驟（1），此步無需去除開放的花蕾；

（3）第三次浸花：距離第二次浸花后1-2天，重復步驟（2）；

（4）浸花后管理：浸花結束后，待植株授粉完畢，去掉羊皮紙袋，不定時剪掉新生出的側枝花序以及經過浸花的花序其頂端新萌發的花蕾，直接用水澆灌培養植株，直至收獲。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中所述PCR擴增激活標簽載體pCB260上的bar片段的引物序列為：

Bar-R：5’- CACCATCGTCAACCACTACATC-3’；

Bar-F：5’- ACTTCAGCAGGTGGGTGTAGAG-3’。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）中所述突變體植株含有pCB260載體。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）中所述得到的適于高密度種植和機械化收獲的轉化植株表型為幼苗期葉片表面發亮，成熟期分枝較少，有效分枝高度增高，并且角果集中在植株頂端。