[發明專利]嗜熱菌株合成長鏈二元酸的應用方法

在審

• 申請號: 201710023896.9
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN107058412A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 李平;楊歆睿;肖林林;馮駿晨
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/38
• 代理公司: 上?？坡蓪＠硎聞账?特殊普通合伙)31290
• 代理人: 葉鳳

1.嗜熱微生物合成制備長鏈二元酸的方法，包括嗜熱微生物篩選、分離及鑒定、制備長鏈二元酸的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)采集的土壤樣本則直接采用稀釋涂布法在正十二烷選擇培養基上進行涂布，于30℃、37℃和45℃水浴中培養3～5天。根據菌落的形態選擇有差別的單菌落接種到對應的液體培養基中，同樣溫度下水浴搖床培養3～5天；

(2)選擇能夠在正十二烷選擇培養基即以烷烴作為唯一碳源的培養基上能夠生長的菌株，在含有甲基紅指示劑的指示培養基上進行劃線培養；

(3)同時，挑取選擇培養基上能夠生長的單菌落，接種于不添加甲基紅指示劑的50mL指示培養基中，分別在30℃、37℃、45℃條件下進行搖瓶培養，并在培養的第一天起，每天取出1mL培養液，并滴加1～2滴甲基紅指示劑，記錄培養4天培養過程中的顏色變化情況；

(4)挑選滴入指示劑后發生顏色變化明顯的菌株，進行后續發酵、生理生化及分子鑒定實驗，最終確定兩株菌株分別為食樹脂假單胞菌及類產堿假單胞菌；

(5)將篩選出的產酸菌株接入50mL種子培養基中，分別在30℃、37℃、45℃下培養48h；

(6)36h擴大培養過后，加入15％已滅菌的正十二烷，進入產酸期；產酸期持續4天，每隔12h或24h調整pH為7.5；

(7)取經離心、過濾后的發酵清液30mL，分別將15mL加入到2支15mL離心管中，并通過滴定法和分光光度法兩種方法進行十二烷二元酸濃度的檢測。