[發(fā)明專利]嗜熱菌株合成長(zhǎng)鏈二元酸的應(yīng)用方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710023896.9
• 申請(qǐng)日: 2017-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN107058412A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李平;楊歆睿;肖林林;馮駿晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 同濟(jì)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/64
• 分類號(hào): C12P7/64;C12R1/38
• 代理公司: 上海科律專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)31290
• 代理人: 葉鳳

1.嗜熱微生物合成制備長(zhǎng)鏈二元酸的方法，包括嗜熱微生物篩選、分離及鑒定、制備長(zhǎng)鏈二元酸的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)采集的土壤樣本則直接采用稀釋涂布法在正十二烷選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，于30℃、37℃和45℃水浴中培養(yǎng)3～5天。根據(jù)菌落的形態(tài)選擇有差別的單菌落接種到對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，同樣溫度下水浴搖床培養(yǎng)3～5天；

(2)選擇能夠在正十二烷選擇培養(yǎng)基即以烷烴作為唯一碳源的培養(yǎng)基上能夠生長(zhǎng)的菌株，在含有甲基紅指示劑的指示培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線培養(yǎng)；

(3)同時(shí)，挑取選擇培養(yǎng)基上能夠生長(zhǎng)的單菌落，接種于不添加甲基紅指示劑的50mL指示培養(yǎng)基中，分別在30℃、37℃、45℃條件下進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，并在培養(yǎng)的第一天起，每天取出1mL培養(yǎng)液，并滴加1～2滴甲基紅指示劑，記錄培養(yǎng)4天培養(yǎng)過程中的顏色變化情況；

(4)挑選滴入指示劑后發(fā)生顏色變化明顯的菌株，進(jìn)行后續(xù)發(fā)酵、生理生化及分子鑒定實(shí)驗(yàn)，最終確定兩株菌株分別為食樹脂假單胞菌及類產(chǎn)堿假單胞菌；

(5)將篩選出的產(chǎn)酸菌株接入50mL種子培養(yǎng)基中，分別在30℃、37℃、45℃下培養(yǎng)48h；

(6)36h擴(kuò)大培養(yǎng)過后，加入15％已滅菌的正十二烷，進(jìn)入產(chǎn)酸期；產(chǎn)酸期持續(xù)4天，每隔12h或24h調(diào)整pH為7.5；

(7)取經(jīng)離心、過濾后的發(fā)酵清液30mL，分別將15mL加入到2支15mL離心管中，并通過滴定法和分光光度法兩種方法進(jìn)行十二烷二元酸濃度的檢測(cè)。