[發明專利]一種大鯢皮膚表皮細胞的分離、培養及鑒定方法

有效

• 申請號: 201710022400.6
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106754647B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 郭燕杰;楊學義;馬西亞;吳衛妮;張延召;史明艷;張瑞潔
• 申請（專利權）人: 洛陽師范學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/6869;C12Q1/6888
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 王明朗

1.一種大鯢皮膚表皮細胞的分離、培養及鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）取活體大鯢尾部的皮膚組織，放入PBS緩沖液中；

（2）在10min內，將放入PBS緩沖液的皮膚組織表面的粘液刮去，再放入75%酒精中浸泡10s；

（3）用PBS緩沖液清洗6-8次，將皮膚組織剪成直徑1mm的組織塊，將組織塊貼到T25培養瓶中，加入4mL培養液進行貼壁培養，每天更換新鮮培養液，皮膚組織塊貼壁培養6天后進行傳代培養，得到大鯢皮膚表皮細胞；

所述的培養液主要成分為DMEM/F12培養基，除DMEM/F12培養基外，還包括培養液總體積15%的胎牛血清以及在培養液中濃度為5μg/mL的胰島素、10ng/mL的KGF和雙抗，雙抗為青霉素和鏈霉素，其中，青霉素含量為100U/mL、鏈霉素含量為0.1mg/mL；所述的DMEM/F12培養基是體積分數60%的DMEM/F12培養基。

2.根據權利要求1所述的大鯢皮膚表皮細胞的分離、培養及鑒定方法，其特征在于，所述的PBS緩沖液為4℃預冷、體積分數60%的添加雙抗的PBS緩沖液，雙抗為青霉素和鏈霉素，其中，青霉素為500U/mL，鏈霉素為0.5mg/mL。

3.根據權利要求1所述的大鯢皮膚表皮細胞的分離、培養及鑒定方法，其特征在于，步驟（3）中的貼壁培養條件為28℃、5% CO₂。