[發明專利]生長激素定量檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710021933.2
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106771265A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 馮健明;陳龍;梁琪芬;徐倩
• 申請（專利權）人: 廣州市豐華生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531
• 代理公司: 廣州一銳專利代理有限公司44369
• 代理人: 李新梅,楊昕昕

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種生長激素定量檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

生長激素（Growth Hormone，GH）是腺垂體細胞分泌的蛋白質，為一種肽類激素，血清生長激素測定有助于巨人癥、肢端肥大癥、生長激素缺乏癥的診斷。目前，生長激素濃度檢測試劑盒90%以上采用化學發光法，且均以血清樣品作為檢測對象。對于以血清樣品作為對象進行檢測，具有以下缺點：成本偏高，血標本不易保存、不便遠距離遞送、運送過程中存在潛在生物安全隱患，給檢測者就診帶來不便；采血前，需給檢測者服用藥物進行生長激素激發試驗，并于不同時間段多次采血，通常需要三次（含）以上采血，多次采血不僅造成身體不適，還會對心理造成影響；由于需服用藥物進行激發試驗，且采血量大，使得檢測不適用于新生兒和低齡兒童。

時間分辨免疫熒光測定（Time Resolved Immunofluorometric assay，TRIFMA）是八十年代初問世的一項新型超微量免疫分析技術，其具體原理為：熒光的時間分辨技術是利用熒光發射體的熒光壽命差別，進行分辨的熒光光譜技術，以鑭系元素為示蹤劑代替放射性同位素，用具有雙功能基團的鑭系元素標記抗原或抗體，當解離出來的鑭系元素與特制的擴增液形成新的螯合物時，其熒光明顯增強且持久，在檢測時，用延遲測量的方法可大大提高檢測靈敏度。

對于生長激素檢測，如何制備一種利用時間分辨免疫熒光測定技術、且克服上述缺點的試劑盒，是目前生長激素檢測亟待解決的問題之一。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種生長激素定量檢測試劑盒及其制備方法，可利用時間分辨免疫熒光測定技術進行生長激素定量檢測，且檢測時，以濾紙干血片為檢測樣本，可避免血清樣品不易保存、不便運輸、需進行生長激素激發試驗、采血量大的缺點，同時可確保檢測結果與血清樣品的檢測結果高度一致。

為解決上述技術問題，本發明提供一種生長激素定量檢測試劑盒，包括實驗緩沖液、濃縮洗液、增強液、包被板、標準品和質控品及標記物；實驗緩沖液包括1.0-20.0g/L牛血清白蛋白和第一緩沖液；濃縮洗液包括1.0-10.0ml/L Tween-20和第二緩沖液；增強液包括1-5mg/Lβ-萘甲酰三氟丙酮、15-30mg/L三正辛基氧化磷和第三緩沖液；包被板為采用包被液、封閉液、反應板制成的包被板，包被液包括：1-10ppm Proclin300、第四緩沖液、1-10μg/ml生長激素單克隆抗體，封閉液包括：1.0-10.0g/L海藻糖、質量體積比0.4-0.6%的牛血清白蛋白、第四緩沖液，包被液的包被量為100-200μl/孔，封閉液的封閉量為250-280μl/孔；標準品和質控品為濾紙干血片，濾紙干血片包括8個濃度的混合物，混合物包括血紅細胞、去激素陰性血清混合基質和生長激素；標記物由生長激素單克隆抗體與鑭系元素離子螯合物按1:1-1:6m/m制得。

其中，第一緩沖液各組分及濃度為：0.009-0.011g/L乙二胺四乙酸二鈉，49-51mmol/L、pH7.7-7.9Tris-HCl；第二緩沖液各組分及濃度為：0.384-0.386mol/L NaCl，0.123-0.125mol/L、pH7.7-7.9Tris-HCl；第三緩沖液各組分及濃度為：0.9-1.1ml/L TritonX-100，0.09-0.11mol/L鄰苯二甲酸氫鉀-冰醋酸；第四緩沖液為0.04-0.06mol/L、pH9.5-9.7碳酸鈉-碳酸氫鈉。

其中，實驗緩沖液的牛血清白蛋白的濃度為10.0g/L，Tween-20的濃度為4.0ml/L，β-萘甲酰三氟丙酮的濃度為4mg/L，三正辛基氧化磷的濃度為20mg/L，Proclin300的濃度為5 ppm，生長激素單克隆抗體的濃度為10μg/ml，海藻糖的濃度為5.0g/L，牛血清白蛋白的濃度為0.5%，生長激素單克隆抗體與鑭系元素離子螯合物的比例為1:1m/m。

其中，第一緩沖液各組分及濃度為：0.01g/L乙二胺四乙酸二鈉，50mmol/L、pH7.8Tris-HCl；第二緩沖液各組分及濃度為：0.385mol/L NaCl，0.124mol/L、pH7.8Tris-HCl；第三緩沖液各組分及濃度為：1.0ml/L TritonX-100，0.10mol/L鄰苯二甲酸氫鉀-冰醋酸；第四緩沖液為0.05mol/L、pH9.6碳酸鈉-碳酸氫鈉。

其中，反應板為96孔反應板。