[發明專利]一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料及其制備方法

在審

• 申請號: 201710021832.5
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106581758A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 盧亢;陳錦濤;陳泰瀛
• 申請（專利權）人: 廣東泰寶醫療器械技術研究院有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/18;A61L27/22;A61L27/60;A61L27/54
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 鄭永泉,陳嘉毅

技術領域

本發明屬于生物醫學工程技術領域，特別是皮膚創傷敷料制備技術領域，公開了一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料及其制備方法。

背景技術

隨著對皮膚損傷治療研究的進展，組織工程皮膚是近年來研究的熱點，有著廣闊的臨床應用前景。皮膚在面臨大面積燒傷或損壞時急需獲得大量的表皮覆蓋以促進皮膚組織的再生與修復。脫細胞真皮基質具有作為理想的皮膚修復材料的諸多優點：（1）價格便宜，來源廣泛；（2）有良好的組織相容性，本身無毒、抗原性低；（3）可降解性，材料在降解過程中逐漸被吸收并保持穩定的體積；（4）維持生長其上的細胞形態，促進細胞黏附和生長；（5）具有一定的孔隙率；（6）具有一定的機械強度和韌性，適合加工裁剪。但由于脫細胞真皮基質是一種無活性的支架材料，在使用中血管化能力低特別是異種脫細胞真皮基質，在臨床應用中遇到的另一個問題是如何解決大塊組織或器官植入體內的營養來源，很顯然，在沒有血供的情況下要實現大量活細胞在體內的存活是不可能的，如何解決脫細胞真皮基質在應用中血管化能力不足的問題，是突破脫細胞真皮基質在臨床應用推廣瓶頸的關鍵。此外，脫細胞真皮基質沒有抗菌能力，作為敷料使用時容易受細菌感染而導致創面感染，又具有交叉感染的危險性等缺點，也限制了其作為敷料在臨床上的應用。

血管內皮生長因子(VEGF)可促進血管內皮細胞分裂與增殖，增加微靜脈、小靜脈的通透性，誘導絲氨酸蛋白酶和間質膠原酶的表達，使細胞質鈣聚集，誘導血管生成，在創傷愈合中起著重要的作用。基膜的降解對內皮細胞遷移非常必要, 并且是病理性血管增生啟動的關鍵環節。VEGF能誘導MMP的表達, MMP對 VEGF誘導內皮細胞遷移起必要作用。 此外VEGF可促進纖溶酶原激活劑及其蛋白質分解酶的釋放, 從而降解毛細血管基底膜, 有利于受其刺激而增生內皮細胞遷移和趨化, 誘使匯聚的微血管內皮細胞 侵入纖維凝膠, 形成管樣結構或已存在的血管以發芽形式形成 新生血管。此外，VEGF能促進內皮細胞增殖的信號通路和內皮細胞存活作用與抗凋亡作用的信號通路。

抗菌肽LL-37是cathelicidin肽Hcap-18的C末端切割產物，能直接殺死細菌、真菌和病毒。抗菌肽LL-37廣譜抗菌，對細菌、真菌、病毒、支原體均有抑制作用。尤其可以抑制創傷常見的感染菌種，如甲類鏈球菌 (Group A Streptococcus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)、大腸桿菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)，其最小抑菌濃度( MIC) 分 別為 16、1. 5、6. 5、3. 2、6. 5、0. 8 μmol/L。除了直接的殺菌作用，抗菌肽LL-37還抑制細菌產生的內毒素和CD14陽性細胞結合，有助于改善膿毒血癥，減少感染造成的死亡。此外，抗菌肽LL-37還通過趨化免疫細胞、調節炎性促進因子/抑制因子的分泌、協調天然免疫和獲得性免疫等功能，發揮免疫調節作用。抗菌肽LL-37還可作用于血管內皮細胞和上皮細胞，刺激血管生成和促進損傷修復。

發明內容

本發明的目的在于針對現有的脫細胞真皮基質敷料的血管化能力低，誘導修復能力差，且不具備抗菌性能，提供一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料及其制備方法。本發明通過以豬源性脫細胞真皮敷料為基質，通過聚多巴胺表面修飾后將血管內皮生長因子（VEGF）和抗菌肽LL-37固定在其表面制備出一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料。該脫細胞真皮敷料免疫原性低，材料來源豐富，具有良好的生物相容性和抗菌性能，且具有良好的血管化能力。

為實現上述目的，本發明的技術方案為一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料由脫細胞真皮基質、血管內皮生長因子（VEGF）和抗菌肽LL37。

進一步的，所述的脫細胞真皮敷料按重量份數計由脫細胞真皮基質10份、聚多巴胺0.25-0.5份、血管內皮生長因子0.01-0.05份、抗菌肽LL37 0.1-0.5組成。

優選的，所述的血管內皮生長因子（VEGF），抗菌肽LL37均購自美國Thermo Fisher Scientifi公司。

為實現上述目的，本發明的另一技術方案為：一種具誘導血管化能力的抗菌脫細胞真皮敷料的制備方法，所述的制備方法通過以下步驟實現：（1）脫細胞真皮基質聚多巴胺表面修飾、（2）血管內皮生長因子（VEGF）的固定、（3）抗菌肽LL37的固定。