[發(fā)明專利]一種制備Symplocin A及其差向異構(gòu)體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710021396.1
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN108299545B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏邦國;司長梅;邵路平;毛卓亞;王雪梅;孫遜;林國強
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發(fā)明屬藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種具有抑制組織蛋白酶E活性的化合物Symplocin A及其差向異構(gòu)體的制備方法；本發(fā)明方法采用新的合成路線完成了Symplocin A及其兩個差向異構(gòu)體的合成，制得Symplocin A并合成了Symplocin A的兩個差向異構(gòu)體，本方法具有產(chǎn)率高、易分離，成本低，便于擴大生產(chǎn)等優(yōu)點；依據(jù)化合物Symplocin A的活性推測制得的2種Symplocin A異構(gòu)體對組織蛋白酶E具有極強的抑制活性，有望成為腫瘤治療的新靶點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及制備Symplocin A的方法，尤其涉及制備具有抑制組織蛋白酶E活性的化合物Symplocin A及其差向異構(gòu)體的方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)有技術(shù)公開了組織蛋白酶（cathepsin）是在各種動物組織的細胞內(nèi)的一類蛋白酶，是一類在酸性環(huán)境中被活化的溶酶體蛋白酶，到目前為止，從組織蛋白酶A到組織蛋白酶E均見有報道；研究表明，絕大多數(shù)蛋白酶屬于半胱氨酸蛋白酶，而組織蛋白酶E是組織蛋白酶家族中一種細胞內(nèi)天冬氨酸蛋白酶，屬于胃蛋白酶家族；組織蛋白酶E主要以兩種方式存在：一種是以二硫鍵連接的二聚體存在，相對分子質(zhì)量約為90000；而以單體存在時其相對分子質(zhì)量為43000。

研究顯示，組織蛋白酶E主要存在于人體免疫系統(tǒng)的抗原提呈細胞內(nèi)，如淋巴細胞，巨噬細胞等；但在其他組織細胞中也有發(fā)現(xiàn)，如胃粘膜上皮細胞，脾臟，肺上皮細胞等；另外，研究發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶E在其他生物體內(nèi)也有分布，例如，在小鼠的紅細胞中可以找到。組織蛋白酶E在不同類型細胞的定位有所不同，如在免疫系統(tǒng)的抗原提呈細胞內(nèi)，主要位于胞內(nèi)小間隔，而在胃細胞主要位于細胞質(zhì)膜上。有研究報道了組織蛋白酶E和組織蛋白酶D具有同源性，即都為天冬氨酸蛋白酶；組織蛋白酶E由兩個同源結(jié)構(gòu)域組成，每個結(jié)構(gòu)域的活性部位都含有一個高度保守的由3個氨基酸組成的基序，其活性部位基序中第284位蘇氨酸殘基對其活性至關(guān)重要，如將284位蘇氨酸殘基用絲氨酸進行替換構(gòu)建變異型組織蛋白酶E，其酶的催化活性下降非常顯著；與細胞蛋白酶D同樣，組織蛋白酶E對底物P1和P1^,位置上的疏水氨基酸殘基表達高度親和力，一般情況下組織蛋白酶E在PH大于6的環(huán)境中幾乎失活，而在酸性PH值下短時間內(nèi)組織蛋白酶E酶原容易出現(xiàn)自動激活，轉(zhuǎn)化為成熟體。

近幾年，組織蛋白酶E與腫瘤疾病的相關(guān)性受到關(guān)注，組織蛋白酶E作為介導腫瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞發(fā)生黏附的一種黏附分子，其受體和配體的相互作用在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，組織蛋白酶E與癌癥的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、Duke^,s分期以及腫瘤分化程度密切相關(guān)。有關(guān)癌癥研究中發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中，組織蛋白酶E和其抑制劑之間的相互平衡作用會影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展；研究顯示，組織蛋白酶E是腫瘤細胞分泌的一種蛋白降解酶，在癌巢的邊緣，蛋白酶和抗蛋白酶之間的平衡被打破，蛋白酶占據(jù)優(yōu)勢，該酶可降解細胞外基質(zhì)及基底膜，促使腫瘤細胞得以穿過破損的基底膜和基質(zhì)蛋白分解帶從而發(fā)生侵染和轉(zhuǎn)移；所以在各種癌癥的研究中發(fā)現(xiàn)，組織蛋白酶E的表達水平與癌細胞侵染和轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，而侵染和轉(zhuǎn)移是癌癥患者預后的主要原因，因此，組織蛋白酶E有望成為腫瘤輔助診斷的指標，其抑制劑也有望成為腫瘤治療的新靶點，并有可能改善進展期癌癥患者的預后，延長其生存期。

Symplocin A是2012年由美國Molinski課題組從巴哈馬海域的海洋藍細菌Symploca sp.中提取到的Grassystatin A/B的結(jié)構(gòu)類似物，其N-端為N,N-二甲基異亮氨酸殘基。值得注意的是，此前發(fā)現(xiàn)的所有來自海洋藍細菌的該類帶有端位N,N-二甲基氨基酸殘基的化合物其α-CH位的構(gòu)型均為L型，而Symplocin A則為D型；實驗顯示，Symplocin A不具有明顯的細胞毒性，但是對組織蛋白酶E具有極強的抑制活性（IC₅₀ = 300 pM），與Pepstatin相當，強于Grassystatin A/ B（IC₅₀分別為886和354 pM）。迄今，尚未見有全合成及多樣性合成的報道。