[發(fā)明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710019500.3
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108303542B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋啟超;左青山;紀(jì)良心;劉聰;李炎暉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海鳴捷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 北京深川專利代理事務(wù)所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

本發(fā)明公開了一種豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒及其檢測方法，本發(fā)明的試劑盒采用磁性微粒包被的抗原、發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的蛋白與待測樣本中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)而進(jìn)行待測樣品中抗體含量的測定。本發(fā)明的試劑盒實(shí)現(xiàn)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的定量檢測，靈敏度高，檢測范圍寬，快速，重復(fù)性好，全自動操作及高通量檢測的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒及采用該試劑盒進(jìn)行檢測的檢測方法。

背景技術(shù)

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine?reproductive?and?respiratory?syndromevirus，PRRSV)引起的一種高度接觸性傳染病，主要引起懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎等繁殖障礙，仔豬和育肥豬出現(xiàn)呼吸道癥狀。本病的傳染性極強(qiáng)，一旦感染，發(fā)病豬將持續(xù)高溫41度以上并出現(xiàn)急性死亡；妊娠母豬流產(chǎn)率高達(dá)30％以上；仔豬則100％發(fā)病并伴隨著50％以上的死亡率風(fēng)險，給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

PRRSV屬于動脈炎病毒科動脈炎病毒屬，分為2個型，即歐洲型(Ⅰ型)和美洲型(Ⅱ型)。目前我國流行主要是Ⅱ型毒株。該病毒的病毒粒子中含有一個核衣殼，核衣殼由正鏈RNA基因組和核衣殼蛋白(N)組成，核衣殼外邊包裹一層囊膜；病毒的囊膜有6種病毒結(jié)構(gòu)蛋白：E、M、GP2、GP3、GP4和GP5。M、N和GP5三種蛋白是PRRS病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白。

在我國，免疫接種是防治豬繁殖與呼吸綜合征病毒的主要策略。豬繁殖與呼吸綜合征病毒病毒抗原蛋白起著重要的作用，也是必須的結(jié)構(gòu)蛋白，免疫后能產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體。免疫后豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體效價與攻毒保護(hù)具有明顯的相關(guān)性，所以通過抗體水平的監(jiān)測來制定合理、有效的免疫程序是提高群體免疫水平的保證。

豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白是主要的中和性抗原蛋白，其抗體是疫苗免疫后抗體水平的監(jiān)測和病毒感染后抗體水平檢測的主要標(biāo)的，抗體水平高低與其免疫或感染狀況直接相關(guān)，所以有豬繁殖與呼吸綜合征抗體定量檢測的現(xiàn)實(shí)需求。現(xiàn)有的檢測機(jī)構(gòu)有獸醫(yī)站、疫苗公司、養(yǎng)殖場等存在著大量的樣本，也對大通量的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒和儀器有著需求。現(xiàn)有的ELISA、病毒中和試驗(yàn)、膠體金等的方法難以滿足。

目前建立并應(yīng)用的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測方法有ELISA方法、病毒中和試驗(yàn)、免疫熒光法、膠體金試紙條等方法，其中ELISA方法目前是豬繁殖與呼吸綜合征抗體最常用的方法，ELISA所測OD值的范圍在0.1-3.5，限定了所測量的抗體范圍較窄，只能做到半定量，反應(yīng)的時間通常在2小時左右，時間較長；病毒中和試驗(yàn)是通過豬繁殖與呼吸綜合征病毒和抗體在細(xì)胞上中進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)來判定抗體滴度，能較全面反映中和抗體的高低，全過程為病毒滴定、抗體中和、結(jié)果判定等過程需5-7天時間，全過程只能人工來操作、判定，重復(fù)性差；免疫熒光法通常也是在細(xì)胞上操作，存在靈敏度不高，重復(fù)性差等缺點(diǎn)；膠體金方法能快速得出結(jié)果，但是只能定性，難以定量，限制了應(yīng)用范圍。

專利CN104237513A(公布日為2014.12.24)公開了一種甲狀腺過氧化物酶抗體磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，包括TPO-Ab校準(zhǔn)品，TPO-Ab稀釋液，偶聯(lián)有鏈霉親和素的磁性微粒懸浮液，生物素標(biāo)記的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶標(biāo)結(jié)合物，TPO-Ab質(zhì)控品，化學(xué)發(fā)光液A和B，20倍濃縮洗液和反應(yīng)管，該試劑盒對甲狀腺過氧化物酶抗體的含量進(jìn)行定量測定，實(shí)現(xiàn)靈敏度高，特異性，精密性，穩(wěn)定性良好的效果。該試劑盒在人抗體上應(yīng)用廣泛，但在動物抗體上還未有報道。