[發明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710019500.3
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108303542B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 宋啟超;左青山;紀良心;劉聰;李炎暉
• 申請（專利權）人: 上海鳴捷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 北京深川專利代理事務所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白偶聯或間接偶聯磁性微粒的溶液，發光標記物標記的蛋白溶液和發光底物；

所述豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白選自豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白全長、GP5蛋白片段、GP5蛋白多肽、N蛋白、M蛋白中的一種，所述的磁性微粒為以Fe₃O₄為核心，表面覆有聚合物涂層，并導入羧基、甲苯磺?；鶊F的微粒；

所述磁性微粒的直徑為1-3μm，所述磁性微粒直徑CV＜3％；

所述試劑盒中還包括稀釋液，質控品，校準品和清洗液，稀釋液選自緩沖液、牛血清白蛋白、阻斷劑、單克隆抗體，多克隆抗體中的一種或多種的組合；

所述質控品為豬繁殖與呼吸綜合征抗體低值質控品和高值質控品，所述低值質控品的質控范圍為20-30U/mL，高值質控品的質控范圍為100-150U/mL；所述清洗液為0.05mol/LpH為8.0的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液或0.01mol/LpH為7.0的磷酸鹽(PBS)緩沖液，所述Tris緩沖液和PBS緩沖液中分別含有0.1％的Tween-20；

所述豬繁殖與呼吸綜合征GP5蛋白全長、片段、多肽的最適用量為0.8nmol/10mg磁性微粒；N蛋白全長的最適用量為0.67nmol/10mg磁性微粒；M蛋白片段的最適用量為0.91nmol/10mg磁性微粒。

2.如權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白偶聯磁性微粒的溶液制備方法包括如下步驟：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用緩沖液清洗磁性微粒，并懸浮于緩沖液中；

S2，加入純化的豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白；

S3，加入交聯劑或催化劑，振蕩反應；

S4，磁鐵吸附磁性微粒，洗滌，懸浮在含有封閉劑的溶液中。

3.如權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白間接偶聯磁性微粒的溶液的制備方法包括如下步驟：

1)磁性微粒結合親和素

S1，取含磁性微粒的溶液，采用緩沖液清洗磁性微粒，并懸浮于緩沖液中；

S2，加入親和素；

S3，加入交聯劑或催化劑，振蕩反應；

S4，磁鐵吸附磁性微粒，洗滌，懸浮在含有封閉劑的溶液中，構成磁性微粒-親和素復合物；

2)豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白結合生物素

S1，取豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白，透析；

S2，加入生物素，反應；

S3，加入封閉劑，反應；

S3，透析除去未結合的生物素，獲得豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白-生物素；

3)磁性微粒-親和素與豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白-生物素復合物混合，通過親和素與生物素的結合力連接磁性微粒、豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白。

4.如權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光標記物標記的蛋白溶液的制備方法包括如下步驟：

S1，取與豬繁殖與呼吸綜合征抗原蛋白或豬繁殖與呼吸綜合征抗體特異性結合的蛋白，透析；

S2，加入發光標記物，反應；

S3，加入封閉劑，反應；

S4，透析分離未結合的發光標記物。

5.如權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光標記物選自吖啶酯、堿性磷酸酶、過氧化物酶中的任意一種，所述發光標記物標記的蛋白選自豬繁殖與呼吸綜合征抗原、單克隆抗體、多克隆抗體、基因工程抗體、抗豬IgG抗體、抗豬IgM抗體中的一種或多種的組合。

6.如權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光底物與發光標記物一一對應。