[發(fā)明專利]一種以牛大力花藥為外植體的再生方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710016948.X
• 申請(qǐng)日: 2017-01-11
• 公開（公告）號(hào): CN106613991B
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志英;黃碧蘭;徐立
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

本發(fā)明屬植物組培技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種以牛大力花藥為外植體的再生方法，是以牛大力花藥為材料經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)、胚性愈傷組織誘導(dǎo)及增殖，將增殖后的胚性愈傷組織誘導(dǎo)形成胚狀體，再由胚狀體誘導(dǎo)發(fā)育形成小植株，最后將小植株進(jìn)行壯苗培養(yǎng)形成正常植株。本發(fā)明以牛大力花藥為外植體，通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)、胚性愈傷組織誘導(dǎo)、胚發(fā)育和胚萌發(fā)成苗的過(guò)程，建立了一種牛大力的再生體系，并創(chuàng)建了子葉型胚的二次誘導(dǎo)體系，能長(zhǎng)期提供胚性愈傷組織，可為牛大力誘變育種、轉(zhuǎn)基因育種以及牛大力的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬植物組培技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種以牛大力花藥為材料的再生方法，具體是一種利用牛大力花藥誘導(dǎo)分化胚性愈傷組織后，再誘導(dǎo)胚狀體萌發(fā)，萌發(fā)的胚狀體發(fā)育為植株的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

牛大力(Callerya speciosa)，學(xué)名美麗雞血藤，又名豬腳笠、金鐘根、山蓮藕、倒吊金鐘、大力薯，為豆科(Leguminosae)雞血藤屬(Callerya)植物。牛大力是一種藥食兩用植物，我國(guó)野生分布在廣東、廣西、云南、福建和海南等地，《本草綱目》記載，牛大力具有健脾潤(rùn)肺、養(yǎng)腎補(bǔ)虛、舒筋活絡(luò)之功效，適用于腎虛，血?dú)獠煌L(fēng)濕骨痛，經(jīng)常咳嗽患有急慢性支氣管炎及吸煙人士。國(guó)內(nèi)南方各省，包括香港，民間有時(shí)常用牛大力泡酒、煲湯的飲食習(xí)慣，能強(qiáng)身健體，增強(qiáng)體質(zhì)，提高抗病力。隨著市場(chǎng)需求量的不斷增加，野生資源已經(jīng)接近枯竭，人工種植已成為牛大力產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的有效途徑,如何獲取牛大力優(yōu)良新品種已成為亟待解決的問(wèn)題。

長(zhǎng)期以來(lái)牛大力一直處于野生狀態(tài)，優(yōu)良新品種稀缺，從雜合度很高的牛大力野生資源中獲得純化株系，需要很長(zhǎng)時(shí)間的自交過(guò)程，嚴(yán)重影響了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)培育牛大力優(yōu)良無(wú)性系是獲得牛大力新品(系)種的有效途徑。經(jīng)檢索尚未見以牛大力花藥為外植體進(jìn)行再生的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種以牛大力花藥為外植體的再生方法，利用牛大力花藥進(jìn)行培養(yǎng)并再生，可以在短時(shí)間內(nèi)純化牛大力種質(zhì)，為不同種質(zhì)間雜交育種提供材料。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案：

一種以牛大力花藥為外植體的再生方法，包括牛大力花藥獲取、愈傷組織誘導(dǎo)、胚性愈傷組織誘導(dǎo)及增殖、胚狀體誘導(dǎo)及發(fā)育和萌發(fā)成苗的過(guò)程，其具體步驟如下：

1、外植體獲取

在牛大力盛花期，選取花瓣即將露出花萼或露出花萼1mm以內(nèi)的花蕾，用0.1％HgCl₂消毒10min后，無(wú)菌水沖洗4次，吸干水分后取花藥；或75％酒精噴霧，于超凈工作臺(tái)吹干后取花藥；或直接依次剝掉花萼和部分花瓣，用尖頭鑷子小心的取花藥。污染率低于5％，存活率(不變黑或不變白者)90％以上。

2、愈傷組織及胚性愈傷組織誘導(dǎo)

將獲取的牛大力花藥接種在愈傷組織培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度24～26℃，暗培養(yǎng)。培養(yǎng)25天時(shí)，肉眼可見花藥分化出少量愈傷組織；繼續(xù)培養(yǎng)，60天后，部分愈傷組織形成胚性愈傷組織。所述愈傷組織培養(yǎng)基是以改良的MS為基本培養(yǎng)基，并添加2,4-D 3.5mg/L以下、6-BA 0.2～2.0mg/L、蔗糖30g/L、卡拉膠6.5g/L，pH值為5.8。

3、胚性愈傷組織增殖誘導(dǎo)