[發明專利]一種用于治療肺癌基因靶載體復合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201710014980.4
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106692988A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 董兵;郭永軍;馬杰
• 申請（專利權）人: 河南省腫瘤醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/127;A61K47/42;A61K47/28;A61P35/00;C12N15/87
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 潘宏偉

技術領域

本發明涉及醫療技術領域，具體為一種用于治療肺癌基因靶載體復合物及其制備方法。

背景技術

人類基因組草圖的繪制完成及生物與化學分子生物學理論的不斷發展為基因治療打下了堅實的基礎，基因治療已成為醫學界最活躍的研究領域之一，基因治療是指將外源正常基因導入靶細胞，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉移技術將其插入病人的適當的受體細胞中，使外源基因制造的產物能治療某種疾病。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術，理想的基因治療方案須具備有效性和安全性，這就需要有效目的基因在表達時具有明確靶向性，因此靶向性基因載體的開發對基因治療的發展尤為重要，它的有效開發必將推動基因治療向常規治療方法的轉變，普通制備用于治療肺癌基因靶載體復合物的基因載體的基因傳遞效率較低，不利于進行用于治療肺癌基因靶載體復合物的配制，為此，我們提出一種用于治療肺癌基因靶載體復合物及其制備方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于治療肺癌基因靶載體復合物及其制備方法，以解決上述背景技術中提出的普通制備用于治療肺癌基因靶載體復合物的基因載體的基因傳遞效率較低，不利于進行用于治療肺癌基因靶載體復合物的配制的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種用于治療肺癌基因靶載體復合物，該用于治療肺癌基因靶載體復合物的組成成分如下：

人體肺癌細胞株5-10份、CD147納米基因載體納米顆粒混懸液4-8份、碳化二亞胺鹽酸鹽2-8份、脂質體載體5-10份、兔抗人CD147單克隆體4-8份、實驗用水0.5-1.5份、血清液5-10份、基因轉染試劑4-8份、DNA聚合酶4-8份、限制性內切酶4-8份。

優選的，所述脂質體載體為N-三甲基溴化銨膽固醇微粒。

優選的，所述CD147納米基因載體納米顆粒混懸液為15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液。

優選的，所述轉染試劑為聚合物轉染試劑。

優選的，所述實驗用水為三蒸水。

優化的，該用于治療肺癌基因靶載體復合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識別功能的添加：將兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液等體積混懸于含有碳化二亞胺鹽酸鹽的實驗用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質粒的復合：將增加識別CD147蛋白的磁性納米基因載體與脂質體載體進行混合，再加入DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復合物；

S3：復合物與靶細胞的融合：先將配制的粒狀復合物與人體肺癌細胞株在基因轉染試劑的條件下進行轉染處理，再將復合物與人體肺癌細胞株在血清液中進行融合，通過人體肺癌細胞株的內吞或者吞噬作用，使得復合物進入到人體肺癌細胞中，在細胞內緊密的復合物對DNA起到保護作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在復合物與靶細胞的融合物中加入限制性內切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細胞分裂過程中進入細胞核，修補缺失基因或者相關異常基因，而靶向性載體則分解成小分子化合物通過細胞新陳代謝排出細胞；

S5：靶向基因載體的檢測：對復合物制備過程和復合物對肺癌細胞的作用進行實時檢測。

優選的，所述步驟S5中對復合物制備過程和復合物對肺癌細胞的作用進行實時檢測的檢測內容包括肺癌細胞CD147表達量的檢測、細胞吞噬效果的檢測、細胞功能蛋白表達量的檢測、復合物安全性檢測、完成基因載體和目的基因的脫離過程后的肺癌細胞的增殖能力的檢測、細胞遷移能力的檢測。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：與現有的用于治療肺癌基因靶載體復合物及其制備方法相比，本發明在制備用于治療肺癌基因靶載體復合物時使用的基因載體為CD147納米基因載體，納米基因載體在遞送治療基因的過程中，可以避免基因損耗，增加病灶位置基因濃度，并促進細胞內吞，提高治療基因的生物利用率，進而提高了基因傳遞的效率。

附圖說明

圖1為本發明制備方法流程圖。

具體實施方式