[發(fā)明專利]一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710014980.4
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106692988A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董兵;郭永軍;馬杰
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/127;A61K47/42;A61K47/28;A61P35/00;C12N15/87
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)61223
• 代理人: 潘宏偉

1.一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，其特征在于：該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物的組成成分如下：

人體肺癌細(xì)胞株5-10份、CD147納米基因載體納米顆粒混懸液4-8份、碳化二亞胺鹽酸鹽2-8份、脂質(zhì)體載體5-10份、兔抗人CD147單克隆體4-8份、實(shí)驗(yàn)用水0.5-1.5份、血清液5-10份、基因轉(zhuǎn)染試劑4-8份、DNA聚合酶4-8份、限制性內(nèi)切酶4-8份。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，其特征在于：所述脂質(zhì)體載體為N-三甲基溴化銨膽固醇微粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，其特征在于：所述CD147納米基因載體納米顆粒混懸液為15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，其特征在于：所述轉(zhuǎn)染試劑為聚合物轉(zhuǎn)染試劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物，其特征在于：所述實(shí)驗(yàn)用水為三蒸水。

6.一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法，其特征在于：該用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法包括如下步驟：

S1：靶向基因載體識(shí)別功能的添加：將兔抗人CD147單克隆體配置成1g/L,的溶液，再將其與濃度為15g/L的CD147納米基因載體納米顆粒混懸液等體積混懸于含有碳化二亞胺鹽酸鹽的實(shí)驗(yàn)用水中，在4攝氏度條件下振蕩8小時(shí)，再在磁性分離器中收集含有磁性成份的納米顆粒，制成識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體；

S2：基因載體與質(zhì)粒的復(fù)合：將增加識(shí)別CD147蛋白的磁性納米基因載體與脂質(zhì)體載體進(jìn)行混合，再加入DNA聚合酶，由于在靜電荷力和分子間作用力的作用，使得DNA分子折疊，形成粒狀的復(fù)合物；

S3：復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合：先將配制的粒狀復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在基因轉(zhuǎn)染試劑的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理，再將復(fù)合物與人體肺癌細(xì)胞株在血清液中進(jìn)行融合，通過人體肺癌細(xì)胞株的內(nèi)吞或者吞噬作用，使得復(fù)合物進(jìn)入到人體肺癌細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)緊密的復(fù)合物對DNA起到保護(hù)作用，使得DNA避免被核酸酶降解；

S4：基因載體和目的基因的脫離：在復(fù)合物與靶細(xì)胞的融合物中加入限制性內(nèi)切酶，目的基因通過核膜孔或者是在分細(xì)胞分裂過程中進(jìn)入細(xì)胞核，修補(bǔ)缺失基因或者相關(guān)異常基因，而靶向性載體則分解成小分子化合物通過細(xì)胞新陳代謝排出細(xì)胞；

S5：靶向基因載體的檢測：對復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于治療肺癌基因靶載體復(fù)合物制備方法，其特征在于：所述步驟S5中對復(fù)合物制備過程和復(fù)合物對肺癌細(xì)胞的作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測的檢測內(nèi)容包括肺癌細(xì)胞CD147表達(dá)量的檢測、細(xì)胞吞噬效果的檢測、細(xì)胞功能蛋白表達(dá)量的檢測、復(fù)合物安全性檢測、完成基因載體和目的基因的脫離過程后的肺癌細(xì)胞的增殖能力的檢測、細(xì)胞遷移能力的檢測。