[發明專利]一種利用環糊精葡萄糖基轉移酶轉糖基反應提高染料木素水溶性的方法

在審

• 申請號: 201710014828.6
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106754604A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 韓瑞枝;倪曄;姜明楊;葛彬彬;許國超;董晉軍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/10;C12P19/18;C12P19/44;C12R1/19
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1.一種產環糊精糖基轉移酶的基因工程菌，其特征在于：

1)采用化學全合成或PCR方法克隆GenBank accession no.JX412224所示的co-α-CGTase基因序列；

2)將步驟1)獲得的環糊精葡萄糖基轉移酶基因連接至大腸桿菌表達載體pET20b(+)，得到重組表達載體；

3)將步驟2)獲得的重組表達載體轉化至大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)得到基因工程菌。

2.一種應用權利要求1所述基因工程菌發酵生產環糊精葡萄糖基轉移酶的方法，其特征在于：

以產環糊精葡萄糖基轉移酶的基因工程菌為生產菌株，活化后接種至含100μg/mL氨芐青霉素的TB液體培養基；在適當溫度(30～37℃)振蕩培養至OD₆₀₀＝0.6～0.8，加入0.01mM終濃度的IPTG誘導胞外表達，并在低溫(16～25℃)繼續振蕩培養一定時間(85～95h)后，低溫離心除去菌體，收集富含環糊精葡萄糖基轉移酶的上清液。

3.一種應用權利要求2所述環糊精葡萄糖基轉移酶的純化方法，其特征在于：

向所述上清液中采用硫酸銨鹽析，低溫離心并取沉淀物復溶后透析除鹽。通過鎳柱親和層析后，獲得純化后的環糊精葡萄糖基轉移酶。

4.一種應用權利要求3所述純化后的環糊精糖基轉移酶催化染料木素糖基化反應，其特征在于：

分別以染料木素(溶解于DMSO)作為糖基受體；以α-環糊精(溶解于50mM,pH 6.5PBS緩沖液)作為糖基供體，通過環糊精糖基轉移酶催化合成糖基化染料木素。