[發(fā)明專利]一種利用環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶轉糖基反應提高染料木素水溶性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710014828.6
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106754604A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設計）人: 韓瑞枝;倪曄;姜明楊;葛彬彬;許國超;董晉軍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/10;C12P19/18;C12P19/44;C12R1/19
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1.一種產環(huán)糊精糖基轉移酶的基因工程菌，其特征在于：

1)采用化學全合成或PCR方法克隆GenBank accession no.JX412224所示的co-α-CGTase基因序列；

2)將步驟1)獲得的環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶基因連接至大腸桿菌表達載體pET20b(+)，得到重組表達載體；

3)將步驟2)獲得的重組表達載體轉化至大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)得到基因工程菌。

2.一種應用權利要求1所述基因工程菌發(fā)酵生產環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的方法，其特征在于：

以產環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的基因工程菌為生產菌株，活化后接種至含100μg/mL氨芐青霉素的TB液體培養(yǎng)基；在適當溫度(30～37℃)振蕩培養(yǎng)至OD₆₀₀＝0.6～0.8，加入0.01mM終濃度的IPTG誘導胞外表達，并在低溫(16～25℃)繼續(xù)振蕩培養(yǎng)一定時間(85～95h)后，低溫離心除去菌體，收集富含環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的上清液。

3.一種應用權利要求2所述環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的純化方法，其特征在于：

向所述上清液中采用硫酸銨鹽析，低溫離心并取沉淀物復溶后透析除鹽。通過鎳柱親和層析后，獲得純化后的環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶。

4.一種應用權利要求3所述純化后的環(huán)糊精糖基轉移酶催化染料木素糖基化反應，其特征在于：

分別以染料木素(溶解于DMSO)作為糖基受體；以α-環(huán)糊精(溶解于50mM,pH 6.5PBS緩沖液)作為糖基供體，通過環(huán)糊精糖基轉移酶催化合成糖基化染料木素。