[發明專利]一種納豆激酶的轉基因方法在審
| 申請號： | 201710014720.7 | 申請日： | 2017-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN106755017A | 公開（公告）日： | 2017-05-31 |
| 發明（設計）人： | 程佳祎;王躍駒 | 申請（專利權）人： | 程佳祎;王躍駒 |
| 主分類號： | C12N15/57 | 分類號： | C12N15/57;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371 | 代理人： | 李進 |
| 地址： | 314000 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 激酶 轉基因 方法 | ||
1.一段分離的DNA片段，用于表達納豆激酶，其序列為SEQ ID NO：1所示。
2.一種載體，其包含權利要求1所述的DNA片段。
3.根據權利要求2所述的載體，其特征在于，所述載體為pUC57。
4.根據權利要求2所述的載體，其特征在于，其通過下列步驟構建得到：
a)、將SEQ ID NO：2所示的菜豆種子特異性啟動子phas連入pCambia3300的EcoRI/SacI位點，得到pPhas；
b)、以權利要求2或3所述載體為模板擴增出納豆激酶基因以及6×His片段，連接入pPhas的SacI/BamHI位點，得到pPhas-aprN；
c)、將胭脂堿合酶終止子nosT片段連接入pPhas-Natto的BamHI/PstI位點即得。
5.根據權利要求2所述的載體，其特征在于，其通過下列步驟構建得到：
a)、將SEQ ID NO：3所示的番茄果實特異性啟動子LA22CD07連入pCambia2200的SacI/KpnI位點，得到pLA22CD07；
b)、以權利要求2或3所述載體為模板擴增出納豆激酶基因以及6×His片段，連接入pLA22CD07的KpnI/BamHI位點，得到pLA22CD07-aprN；
c)、將胭脂堿合酶終止子nosT片段連接入pLA22CD07-aprN的BamHI/PstI位點即得。
6.一種宿主細胞，其被權利要求2～5任一項所述的載體所轉化；
優選的，所述宿主細胞為農桿菌。
7.一種轉基因方法，用于將納豆激酶基因轉入目的植物，其特征在于，包括：
1)、將權利要求2、4、5任一項所述的載體通過宿主細胞介導導入目的植物的細胞；
2)、生出轉基因植物；
3)、選擇出轉基因植物；
4)、可選的，增殖步驟3)獲得的植物以獲得后代。
8.根據權利要求7所述的轉基因方法，其特征在于，所述目的植物為雙子葉植物。
9.根據權利要求8所述的轉基因方法，其特征在于，所述目的植物為葫蘆科植物或豆科植物。
10.根據權利要求9所述的轉基因方法，其特征在于，所述目的植物為黃瓜或大豆。
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