[發(fā)明專利]焦磷酸測序法檢測TERT啟動子突變試劑盒及方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710013157.1 | 申請日： | 2017-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN108285922A | 公開（公告）日： | 2018-07-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李智;唐新月;石峰 | 申請（專利權(quán)）人： | 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113 | 代理人： | 盧宏;周棟 |
| 地址： | 410008 湖*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 試劑盒 突變 焦磷酸測序法 檢測 緩沖溶液 退火 結(jié)合緩沖溶液 洗滌緩沖溶液 焦磷酸測序 啟動子上游 甲狀腺癌 突變試劑 早期診斷 模板DNA 高通量 變性 磁珠 篩查 引物 | ||
1.一種焦磷酸測序法檢測TERT啟動子突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括如下引物：
TERT上游引物5′-CACAGACGCCCAGGACCG-3′；
TERT下游引物5′-GCGCTGCCTGAAACTCGC-3′，下游引物的5′端進行生物素標(biāo)記；
TERT測序引物5′-CCCGCCCCGTCCCGA-3′。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括PCR緩沖液、TaqDNA聚合酶、模板DNA、磁珠、結(jié)合緩沖溶液、洗滌緩沖溶液、退火緩沖溶液和變性緩沖溶液。
3.利用權(quán)利要求1所述的試劑盒進行TERT啟動子突變檢測的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
(1)DNA提取；
(2)聚合酶鏈反應(yīng)：
配制20μl PCR擴增體系，包含：2×GC buffer 10.0μl，dNTP 1.6μl，TERT上游引物0.4μl，TERT下游引物0.4μl，rTaq0.2μl，水6.4μl，模板1μl；按照下面的循環(huán)參數(shù)設(shè)置擴增儀：98℃ 10s預(yù)變性；然后依次在98℃ 10s,65℃ 5s,72℃ 12s,進行35個循環(huán)；再在72℃保持2min，最終保持在4℃，得擴增產(chǎn)物；
(3)焦磷酸測序單鏈樣本純化；
(4)TERTC228T/C250T測序引物進行焦磷酸測序；
(5)分析焦磷酸測序結(jié)果。
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