[發(fā)明專利]丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710012209.3 | 申請(qǐng)日： | 2017-01-09 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN106834364A | 公開(kāi)（公告）日： | 2017-06-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 許友民;馬輝;石光東 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 通遼市黃河龍生物工程有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12P7/40 | 分類號(hào)： | C12P7/40;C12N1/16;C12R1/88 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 028400 內(nèi)*** | 國(guó)省代碼： | 內(nèi)蒙古;15 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 丙酮酸 工業(yè) 量產(chǎn) 發(fā)酵 工藝 | ||
1.丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝，其特征是，所述工藝包括以下步驟：
(1)平板培養(yǎng)：
A.平板培養(yǎng)基(g/L)：葡糖糖漿3-4、大豆蛋白胨3-4、牛肉膏蛋白胨瓊脂3-4、碳酸鈣0.5-1、原水溶解，PH自然，121℃-124℃15min滅菌備用；
B.光滑球擬酵母于平板培養(yǎng)基內(nèi)，平板倒置培養(yǎng)皿中28℃-30℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間15h-20h后；
(2)茄瓶培養(yǎng)：
a.茄瓶培養(yǎng)基(g/L)：葡糖糖漿13-14、大豆蛋白胨11-12、牛肉膏蛋白胨瓊脂10-12、碳酸鈣2-2.5、氯化銨0.3-0.5、原水溶解，PH自然，121℃-124℃15min滅菌備用：
b.在無(wú)菌室內(nèi)嚴(yán)格按無(wú)菌操作，從保存平板上挑單菌落涂布在茄瓶固體培養(yǎng)基上；
c.培養(yǎng)條件：28℃-30℃，培養(yǎng)時(shí)間15h-20h后；
d.將茄瓶放置1℃-4℃的冰箱內(nèi)存儲(chǔ)備用；
(3)種子搖瓶培養(yǎng)：
I.搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：葡糖糖漿17-18.5、大豆蛋白胨13.5-15.5、碳酸鈣2.5-4.5、氯化銨0.5-0.8、氯化鎂0.32-0.48、磷酸氫二鉀0.2-0.4、原水溶解并用濃度為1.5mol/L HCL調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始PH為5-6，121℃-124℃15min滅菌備用；
II. 3000ml或5000ml的三角瓶或鋼瓶二十至三十個(gè)，在無(wú)菌室內(nèi)用滅過(guò)菌的接種鏟，從培養(yǎng)好的茄瓶?jī)?nèi)鏟取菌臺(tái)接到500ml的三角瓶或鋼瓶中；接種量為600ml/瓶-1000ml/瓶；培養(yǎng)溫度為28℃-30℃，培養(yǎng)時(shí)間22h-24h；
(4)一級(jí)種子培養(yǎng)：
①一級(jí)種子培養(yǎng)基(g/L)：葡糖糖漿20-25、大豆蛋白胨16.5-18.5、碳酸鈣6.5-8.5、氯化銨1.5-2.8、氯化鎂1.32-3.48、磷酸氫二鉀1.2-2.4、原水溶解并用濃度為1.5mol/L HCL調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始PH為5-6，121℃-124℃15min滅菌備用；
②采用800L種子罐3-5個(gè)；種子搖瓶的合拼至三角鋼瓶?jī)?nèi)，在無(wú)菌環(huán)境下對(duì)種子罐進(jìn)行接種操作，接種量為2000ml/罐-3000ml/罐；
③培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度28℃-30℃，1-6h通氣量比1∶1，6h以后至種子成熟通氣量比：1∶4，罐壓維持在0.03MPa-0.05MPa；
④種子成熟的標(biāo)準(zhǔn)：OD值在40-50之間；
(5)一百五十立方發(fā)酵罐培養(yǎng)：
第一.發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：葡萄糖150-200、磷酸氫二鉀5-10、氯化鎂0.9-1.5、氯化銨8.5-9.5、碳酸鈣20-25、醋酸鈉6-8、消泡劑0.01-0.02、微量元素液3-5mL、維生素液3-5mL，PH用濃度為40mol/LHCL調(diào)至5.0-5.5，121℃-125℃連續(xù)滅菌；
第二.培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度28℃-30℃，1-6h通氣量比1∶1，攪拌轉(zhuǎn)速100r/min-150min；6h-12h通氣量比：1∶2，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min-350min；12h-30h通氣量比：1∶3，攪拌轉(zhuǎn)速400r/min-500min；30h以后通氣量為1∶4，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min-700min；40h-56h攪拌轉(zhuǎn)速800r/min-1000r/min；罐壓維持在：0.03MPa-0.05MPa。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝，其特征是，所述微量元素液(g/L)：氯化鋅3-6、氯化鐵15-18、氯化銅0.2-0.3、氯化錳15-18，濃度為1.5mol/LHCL調(diào)節(jié)PH為5.0-5.0定容至1L-1.5L，121℃-125℃連續(xù)滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝，其特征是，所述維生素液(g/L)：維生素D 0.03-0.04、維生素E 0.003-0.005、維生素B1 0.2-0.3、維生素PP 6-8，濃度為1.5mol/L HCL調(diào)節(jié)PH為5.0-5.5定容至1L-1.5L，121℃-125℃連續(xù)滅菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝，其特征是，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的連消順序：微量元素溶液、發(fā)酵培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4述的丙酮酸工業(yè)量產(chǎn)發(fā)酵工藝，其特征是，所述一級(jí)種子培養(yǎng)中，④種子成熟的標(biāo)準(zhǔn)：波長(zhǎng)660nm條件下的分光光度計(jì)，進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞濃度，成熟標(biāo)準(zhǔn)為：42-45 。
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