[發明專利]一種病毒感染的免疫學快速檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201710011778.6
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106596960A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 嚴銀芳;嚴文馨;劉軍;高平
• 申請（專利權）人: 嚴銀芳
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體地說，涉及一種病毒感染的免疫學快速檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

病毒是一類個體微小、無完整細胞結構、含單一核酸(DNA或RNA)型、必須在活細胞內寄生并復制的非細胞型微生物，它主要由核酸和蛋白質外殼組成。病毒性感染疾病是一類嚴重威脅人類健康的疾病。病毒的檢測方法多種多樣，病毒感染的檢測方法有：病毒的分離培養技術、免疫學方法、分子生物學方法、流式細胞術。目前常用的分子生物學檢測技術主要有核酸分子雜交技術、聚合酶鏈反應、基因芯片技術等。常用的免疫學檢測技術主要有酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光技術、放射免疫技術、化學發光免疫分析技術、電化學免疫分析技術、表面等離子體共振免疫分析技術、蛋白質芯片等。這些病毒的檢測方法各有所長，但均存在一定的局限性，如敏感性不高、操作繁瑣、周期長、費用高等問題，迫切需要開發研制一種快速、簡便、靈敏、準確、經濟的病毒感染檢測技術。在臨床上建立一種確實有效且快速的診斷方法越來越受到醫學界的關注。

發明內容

有鑒于此，本發明針對上述的問題，提供了一種病毒感染的免疫學快速檢測試劑盒及檢測方法，本發明利用免疫學檢測技術快速診斷病毒感染，且檢測結果特異性高、敏感性強、肉眼易判斷，適合于現場快速檢測。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種病毒感染的免疫學快速檢測試劑盒，該試劑盒的組成如下：

其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS-Anti-V MoAb結合物的PBS液。

進一步地，THYRESFUS-Anti-V MoAb結合物通過以下方法制備得到：

(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸鹽緩沖液將25％戊二醛稀釋至5％；

(2)取1mg/mL病毒單克隆抗體0.5mL，加0.5ml 5％戊二醛，37℃水浴結合2h；

(3)加入220.0g/L NaCl 0.1ml充分混勻后，置4℃10min預冷；

(4)加冷無水乙醇2.4ml，顛倒混合，立即1000r/min離心10min；

(5)棄上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，將離心管倒置，控干；

(6)加入0.05mo l/LPH9.5碳酸鹽緩沖液0.5ml溶解沉淀物；

(7)將150μgTHYRESFUS溶于0.5ml 0.15mol/L NaCl，再與醛化病毒單克隆抗體溶液混合；

(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感應顯色物質，調節pH值至9.0-9.5；

(9)于4℃，電磁攪拌下結合24h；

(10)加入0.1ml 0.2mol/L賴氨酸，以封閉殘留的醛基，終止反應；

(11)4℃放置2h；

(12)將反應物通過Sephadex G-200凝膠柱，用PBS洗脫，收集第一洗脫峰；或將反應物裝入透析袋，對0.01mol/L pH7.2PBS，4℃透析過夜并收集；濃縮收集液即為THYRESFUS-Anti-V MoAb結合物，用PBS調節THYRESFUS-Anti-V MoAb至濃度250mg/L，并加入終濃度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。

進一步地，陽性病毒血清是經自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陽性的血清。

進一步地，陰性病毒血清是經自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陰性的血清。

進一步地，自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒的制備及檢測方法如下：20μg/mL病毒單克隆抗體包被ELISA反應板，37℃保溫2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封閉液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀釋的待檢血清100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的病毒兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的HRP標記羊抗兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；TMB-H₂O₂顯色，目測和儀器判斷結果。

進一步地，病毒為麻疹病毒或巨細胞病毒。

本發明還公開了一種病毒感染的免疫學快速檢測方法，采用上述的病毒感染的免疫學快速檢測試劑盒，包括以下步驟：