[發(fā)明專利]一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒及檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710011778.6 | 申請日： | 2017-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN106596960A | 公開（公告）日： | 2017-04-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 嚴(yán)銀芳;嚴(yán)文馨;劉軍;高平 | 申請（專利權(quán)）人： | 嚴(yán)銀芳 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 病毒感染 免疫學(xué) 快速 檢測 試劑盒 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒及檢測方法。
背景技術(shù)
病毒是一類個體微小、無完整細(xì)胞結(jié)構(gòu)、含單一核酸(DNA或RNA)型、必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并復(fù)制的非細(xì)胞型微生物，它主要由核酸和蛋白質(zhì)外殼組成。病毒性感染疾病是一類嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。病毒的檢測方法多種多樣，病毒感染的檢測方法有：病毒的分離培養(yǎng)技術(shù)、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法、流式細(xì)胞術(shù)。目前常用的分子生物學(xué)檢測技術(shù)主要有核酸分子雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)、基因芯片技術(shù)等。常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)、電化學(xué)免疫分析技術(shù)、表面等離子體共振免疫分析技術(shù)、蛋白質(zhì)芯片等。這些病毒的檢測方法各有所長，但均存在一定的局限性，如敏感性不高、操作繁瑣、周期長、費(fèi)用高等問題，迫切需要開發(fā)研制一種快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的病毒感染檢測技術(shù)。在臨床上建立一種確實(shí)有效且快速的診斷方法越來越受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明針對上述的問題，提供了一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒及檢測方法，本發(fā)明利用免疫學(xué)檢測技術(shù)快速診斷病毒感染，且檢測結(jié)果特異性高、敏感性強(qiáng)、肉眼易判斷，適合于現(xiàn)場快速檢測。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，該試劑盒的組成如下：
其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物的PBS液。
進(jìn)一步地，THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物通過以下方法制備得到：
(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸鹽緩沖液將25％戊二醛稀釋至5％；
(2)取1mg/mL病毒單克隆抗體0.5mL，加0.5ml 5％戊二醛，37℃水浴結(jié)合2h；
(3)加入220.0g/L NaCl 0.1ml充分混勻后，置4℃10min預(yù)冷；
(4)加冷無水乙醇2.4ml，顛倒混合，立即1000r/min離心10min；
(5)棄上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，將離心管倒置，控干；
(6)加入0.05mo l/LPH9.5碳酸鹽緩沖液0.5ml溶解沉淀物；
(7)將150μgTHYRESFUS溶于0.5ml 0.15mol/L NaCl，再與醛化病毒單克隆抗體溶液混合；
(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感應(yīng)顯色物質(zhì)，調(diào)節(jié)pH值至9.0-9.5；
(9)于4℃，電磁攪拌下結(jié)合24h；
(10)加入0.1ml 0.2mol/L賴氨酸，以封閉殘留的醛基，終止反應(yīng)；
(11)4℃放置2h；
(12)將反應(yīng)物通過Sephadex G-200凝膠柱，用PBS洗脫，收集第一洗脫峰；或?qū)⒎磻?yīng)物裝入透析袋，對0.01mol/L pH7.2PBS，4℃透析過夜并收集；濃縮收集液即為THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物，用PBS調(diào)節(jié)THYRESFUS-Anti-V MoAb至濃度250mg/L，并加入終濃度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。
進(jìn)一步地，陽性病毒血清是經(jīng)自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陽性的血清。
進(jìn)一步地，陰性病毒血清是經(jīng)自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陰性的血清。
進(jìn)一步地，自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒的制備及檢測方法如下：20μg/mL病毒單克隆抗體包被ELISA反應(yīng)板，37℃保溫2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封閉液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀釋的待檢血清100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的病毒兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的HRP標(biāo)記羊抗兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；TMB-H2O2顯色，目測和儀器判斷結(jié)果。
進(jìn)一步地，病毒為麻疹病毒或巨細(xì)胞病毒。
本發(fā)明還公開了一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測方法，采用上述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，包括以下步驟：
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于嚴(yán)銀芳，未經(jīng)嚴(yán)銀芳許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710011778.6/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
