[發(fā)明專利]一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒及檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710011778.6 | 申請日： | 2017-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN106596960A | 公開（公告）日： | 2017-04-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 嚴銀芳;嚴文馨;劉軍;高平 | 申請（專利權(quán)）人： | 嚴銀芳 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 病毒感染 免疫學(xué) 快速 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒的組成如下：
其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物的PBS液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，所述THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物通過以下方法制備得到：
(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸鹽緩沖液將25％戊二醛稀釋至5％；
(2)取1mg/mL病毒單克隆抗體0.5mL，加0.5ml 5％戊二醛，37℃水浴結(jié)合2h；
(3)加入220.0g/L NaCl 0.1ml充分混勻后，置4℃10min預(yù)冷；
(4)加冷無水乙醇2.4ml，顛倒混合，立即1000r/min離心10min；
(5)棄上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，將離心管倒置，控干；
(6)加入0.05mol/LPH9.5碳酸鹽緩沖液0.5ml溶解沉淀物；
(7)將150μg THYRESFUS溶于0.5ml 0.15mol/L NaCl，再與醛化病毒單克隆抗體溶液混合；
(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感應(yīng)顯色物質(zhì)，調(diào)節(jié)pH值至9.0-9.5；
(9)于4℃，電磁攪拌下結(jié)合24h；
(10)加入0.1ml 0.2mol/L賴氨酸，以封閉殘留的醛基，終止反應(yīng)；
(11)4℃放置2h；
(12)將反應(yīng)物通過Sephadex G-200凝膠柱，用PBS洗脫，收集第一洗脫峰；或?qū)⒎磻?yīng)物裝入透析袋，對0.01mol/L pH7.2PBS，4℃透析過夜并收集；濃縮收集液即為THYRESFUS-Anti-V MoAb結(jié)合物，用PBS調(diào)節(jié)THYRESFUS-Anti-V MoAb至濃度250mg/L，并加入終濃度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性病毒血清是經(jīng)自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陽性的血清。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，所述陰性病毒血清是經(jīng)自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒檢測為陰性的血清。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，所述自制的病毒雙抗夾心ELISA試劑盒的制備及檢測方法如下：20μg/mL病毒單克隆抗體包被ELISA反應(yīng)板，37℃保溫2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封閉液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀釋的待檢血清100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的病毒兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；加入效價為1∶1000的HRP標(biāo)記羊抗兔抗體100μL，37℃保溫30分，洗板3次；TMB-H2O2顯色，目測和儀器判斷結(jié)果。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，其特征在于，所述病毒為麻疹病毒或巨細胞病毒。
7.一種病毒感染的免疫學(xué)快速檢測方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1至6中任一權(quán)利要求所述的病毒感染的免疫學(xué)快速檢測試劑盒，包括以下步驟：
1)反應(yīng)：取一潔凈的載玻片上，分別標(biāo)記為陽性對照孔、測試孔和陰性對照孔，在每孔用移液槍加入12μL的水化溶液，往陽性對照孔中加入3μL陽性病毒血清，而往測試孔中加入3μL待測血清，陰性對照孔加3μL陰性病毒血清，迅速混勻；將載玻片放入一濕盒內(nèi)，將濕盒放入37℃保溫箱反應(yīng)30分鐘；
2)結(jié)果判斷：37℃反應(yīng)30分鐘后，立刻取出濕盒；以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應(yīng)溶液顏色的變化，即判斷檢測結(jié)果；如果溶液為無色，則說明病毒感染陰性；如果為紅色，則說明病毒感染陽性。
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