[發(fā)明專利]一種番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度的熒光指示劑檢測方法在審

申請?zhí)枺?/td>	201710010974.1	申請日：	2017-01-06
公開（公告）號：	CN106770127A	公開（公告）日：	2017-05-31
發(fā)明（設計）人：	趙文超;姚學輝;楊瑞;王建立;趙福寬;王紹輝	申請（專利權）人：	北京農學院
主分類號：	G01N21/64	分類號：	G01N21/64;G01N1/28
代理公司：	北京凱特來知識產(chǎn)權代理有限公司11260	代理人：	鄭立明,付久春
地址：	102206***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種番茄葉片保衛(wèi) 細胞游離離子濃度熒光指示劑檢測方法
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明涉及植物檢測領域，特別是涉及一種番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度的熒光指示劑檢測方法。

背景技術

Ca²⁺作為細胞內的第二信使，參與ABA等激素誘導的氣孔運動中。同時許多生物或非生物脅迫都會引起植物細胞胞質內Ca²⁺濃度([Ca²⁺]_cyt)的變化，植物會根據(jù)[Ca²⁺]_cyt變化的差異解碼不同的刺激從而使細胞作出相應的反應。比如葉片上的保衛(wèi)細胞在受到外界刺激時其膜電位會發(fā)生變化，從而引起[Ca²⁺]_cyt的變化，但每一個成熟的保衛(wèi)細胞由于不是同步發(fā)育的，造成每個保衛(wèi)細胞有其獨有的信號轉導方式。一部分保衛(wèi)細胞[Ca²⁺]_cyt在某種環(huán)境的誘導下會發(fā)生變化，可能會表現(xiàn)為胞質內Ca²⁺濃度的上升，這種上升幅度的不同產(chǎn)生了不同的“鈣信號”，最終導致了外界環(huán)境刺激下氣孔的不同步關閉或打開。

現(xiàn)在一般認為細胞對許多外界環(huán)境和激素等刺激作出的反應是通過細胞胞質中游離Ca²⁺濃度變化來傳遞的，因此檢測細胞內[Ca²⁺]_cyt的變化對于研究信號轉導是非常重要的。近年來鈣離子的熒光測定法得到不斷的發(fā)展，包括定性及定量測定技術，能夠在亞細胞水平實時、無損傷的研究細胞內[Ca²⁺]_cyt的變化。但目前的熒光指示劑檢測方法存在不同植物組織中檢查靈敏度差異大，不同植物組織熒光指示劑裝載條件的差異性且番茄葉片保衛(wèi)細胞中沒有優(yōu)化的具體指示劑熒光檢測方法的問題。

發(fā)明內容

基于上述現(xiàn)有技術所存在的問題，本發(fā)明提供一種番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度的熒光指示劑檢測方法，能間接直觀地檢測番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度。

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度的熒光指示劑檢測方法，包括：

本發(fā)明實施例提供一種番茄葉片保衛(wèi)細胞游離鈣離子濃度的熒光指示劑檢測方法，包括：

步驟1，配制設定濃度的熒光指示劑工作液；

步驟2，獲取番茄葉片下表皮；

步驟3，將配制的所述熒光指示劑溶液裝載至獲取的所述番茄葉片下表皮；

步驟4，用激光掃描共聚焦顯微鏡對裝載所述熒光指示劑溶液的所述番茄葉片下表皮進行熒光圖像采集，根據(jù)所采集的熒光圖像確定番茄葉片保衛(wèi)細胞游離Ca²⁺濃度。

本發(fā)明的有益效果為：通過將配制好的設定濃度熒光指示劑工作液裝載至獲取的番茄葉片下表皮，并利用激光掃描共聚焦顯微鏡對裝載所述熒光指示劑溶液的所述番茄葉片下表皮進行熒光圖像采集，進而間接測定番茄葉片保衛(wèi)細胞游離Ca²⁺濃度。該方法檢測準確，操作方便。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域的普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。

圖1為本發(fā)明實施例提供的番茄表皮保衛(wèi)細胞中不同濃度的Fluo-8AM裝載效果圖；