[發明專利]血清復合靶核酸適配體篩選方法

在審

• 申請號: 201710009628.1
• 申請日: 2017-01-06
• 公開（公告）號: CN106872680A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 栗坤;李健;石明
• 申請（專利權）人: 秦皇島拜恩發生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/68;C12N15/10
• 代理公司: 哈爾濱市邦杰專利代理事務所(普通合伙)23212
• 代理人: 吳江東

1.一種血清復合靶核酸適配體篩選方法，其特征是: 本篩選方法包括四步，第一步將待篩選的血清復合靶與瓊脂磁珠偶聯，形成瓊脂磁珠-血清復合物，37 ℃孵育6小時；第二步將隨機寡核苷酸文庫進行加熱變性處理，與瓊脂磁珠-血清復合物相結合，用緩沖液沖洗掉未結合和結合力弱的靶標分子ssDNA，獲得與血清復合物結合的核酸適配體分子；第三步對血清復合物的核酸適配體分子通過q-PCR擴增，再用PCR擴增產物制備得到次級ssDNA庫，通過q-PCR動態檢測與血清復合物結合的核酸適配體；第四步重復第二步所述的，篩選得到高特異性、強親和力的血清復合物核酸適配體。

2.根據權利要求1所述的血清復合靶核酸適配體篩選方法，其特征是: 所述的第二步隨機寡核苷酸文庫是將5nmol 隨機寡核苷酸溶于4mL結合緩沖液中，所述的結合緩沖液是磷酸緩沖液和5mol／L MgCl2組成的溶液。

3.根據權利要求2所述的血清復合靶核酸適配體篩選方法，其特征是: 磷酸緩沖液和5mol／L MgCl2比例為20：1。

4.根據權利要求1所述的血清復合靶核酸適配體篩選方法，其特征是: 所述的第二步的靶標分子ssDNA是與瓊脂磁珠-血清復合物結合的ssDNA。

5.根據權利要求1所述的血清復合靶核酸適配體篩選方法，其特征是: 所述的第三步制備次級ssDNA庫包括如下步驟：將q-PCR擴增后的產物與鏈霉親和素磁珠37℃孵育6小時，用1%tween+磷酸緩沖液在80℃水浴3次，然后加入2ml結合緩沖液，變性并收集上清液，4℃保存，即制備得到次級ssDNA庫。