[發(fā)明專利]一種單純皰疹病毒II型IgM抗體的免疫層析檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710008363.3
• 申請日: 2017-01-05
• 公開（公告）號: CN106771193B
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳立國;鄒偉權(quán);張亞麗;李慶祥;母潤紅;王濤;蘇焱
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州華弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司44416
• 代理人: 張帥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種單純皰疹病毒II型IgM抗體的免疫層析檢測試劑盒。

背景技術(shù)

單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)屬于人類皰疹病毒α亞科，是DNA雙鏈病毒，人類是其唯一自然宿主。根據(jù)其抗原性質(zhì)的不同，可分為單純皰疹病毒I型(HSV-1型)型和單純皰疹病毒II型(HSV-2型)，兩者之間的基因同源序列約為50％。HSV-1型多感染口、面、眼等腰部以上部位，而HSV-2型則通常感染生殖器及肛周等腰以下部位。皰疹的典型臨床表現(xiàn)出皮膚粘膜上出現(xiàn)集簇性水皰、膿皰。潰瘍和結(jié)痂。

HSV-2型是引起生殖器皰疹最常見的原因，生殖器皰疹已經(jīng)成為感染率最高的性傳播感染之一。孕婦感染單純皰疹病毒易引起胎兒畸形或分娩后嬰兒出現(xiàn)皰疹病毒性腦炎等而嚴重致殘疾病。近年來生殖器皰疹尤其是復發(fā)性生殖器的患病率無論在發(fā)達國家或是發(fā)展中國家均明顯增加。80％以上的HSV-2型感染者并不表現(xiàn)出生殖器皰疹癥狀，或沒有顯著癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)，但仍能間歇性的排毒，在不易察覺的情況下傳染給別人。單純皰疹病毒的特異性抗體和非特異性抗體均在感染后的最初幾周內(nèi)出現(xiàn)，因此，HSV-2型特異性IgM抗體的檢測對于隱形感染和流行病學調(diào)查具有重要作用。

目前，單純皰疹病毒的實驗室診斷方法有細胞培養(yǎng)、抗原檢測、PCR、血清抗體檢測等。細胞培養(yǎng)及PCR方法對實驗場地等實驗條件及人員的要求較高，均不能在大部分的實驗室開展。檢測抗原的直接免疫熒光或ELISA方法均需依賴相應(yīng)的儀器設(shè)備，而且試劑多為進口，價格昂貴。血清抗體檢測如常用的膠體金免疫層析法，其特異性強、靈敏度高、操作簡捷等優(yōu)點而并廣泛應(yīng)用，但是膠體金免疫層析法受環(huán)境和人為因素的影響較大，如當環(huán)境溫度較低時(如冬季)，層析速度慢，需延長反應(yīng)時間，否則容易造成漏檢；或放置于空氣中過長時間，導致受潮，或當環(huán)境濕度過高，膜上毛細作用加強，點膜容易引起T線、C線變寬甚至擴散，影響檢測過程和結(jié)果。因此，需對膠體金免疫層析法檢測HSV-2型特異性IgM抗體的試劑盒進行優(yōu)化，以得到一種受環(huán)境因素影響小、檢測穩(wěn)定性高的單純皰疹病毒II型免疫層析檢測試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題(如膠體金免疫層析法受環(huán)境因素影響大，導致靈敏度和穩(wěn)定性下降等)，本發(fā)明提供了一種單純皰疹病毒II型IgM抗體的免疫層析檢測試劑盒，該試劑盒可顯著降低環(huán)境因素對檢測過程和結(jié)果的影響，保障檢測結(jié)果的靈敏度、準確度和穩(wěn)定性。

本發(fā)明提供的一種單純皰疹病毒II型IgM抗體的免疫層析檢測試劑盒，所述試劑盒由試劑條和塑料卡組裝而成，所述試劑條包括底板，所述底板上粘貼有帶有檢測線(T)和質(zhì)控線(C)的反應(yīng)膜，所述反應(yīng)膜靠近檢測線(T)的一端依次疊加粘貼有膠體金墊、樣品墊，所述反應(yīng)膜靠近質(zhì)控線(C)的一端疊加粘貼有吸收墊，所述反應(yīng)膜上檢測線(T)包被了單純皰疹病毒II型抗原，所述反應(yīng)膜上質(zhì)控線(C)包被了羊抗鼠IgG抗體，所述膠體金墊上包被了膠體金標記的鼠抗人IgM單克隆抗體。

在本發(fā)明試劑盒中，所述反應(yīng)膜由以下方法制得：用緩沖液將單純皰疹病毒II型抗原稀釋至包被濃度為0.8～1.2mg/ml，將羊抗鼠IgG抗體稀釋至包被濃度為1.5～1.8mg/ml，在反應(yīng)膜上分別劃線單純皰疹病毒II型抗原檢測線和羊抗鼠IgG抗體質(zhì)控線，劃線后將反應(yīng)膜置于干燥間，溫度20～25℃，濕度小于30％，干燥4～5小時；

所述膠體金墊由以下方法制得：以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為20nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2M K₂CO₃調(diào)至pH8.0，按100ml膠體金溶液加入2.0mg鼠抗人IgM單克隆抗體，再緩慢添加0.2M K₂CO₃將膠體金溶液調(diào)至pH9.5，添加K₂CO₃的時間為5分鐘，然后室溫攪拌30分鐘，加入終濃度為10mg/ml牛血清白蛋白，1mg/ml聚乙烯吡咯烷酮封閉20～30分鐘，12000r/m離心30分鐘，棄上清，用緩沖液復溶至50ml，按1ml溶液鋪20cm²的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜上，再置于干燥間，溫度20～25℃，濕度小于30％，干燥4～5小時。