[發明專利]一種生產核黃素的工程菌株及其應用

在審

• 申請號: 201710008300.8
• 申請日: 2017-01-05
• 公開（公告）號: CN108277189A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 施明安;孫向宇;G·科賽科;H·賽墨;V·梅格戴夫斯卡;M·塞瓦吉
• 申請（專利權）人: 上海創諾醫藥集團有限公司;赤峰制藥股份有限公司;赤峰蒙廣生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P25/00;A23L33/15;A23K20/174;C12R1/07
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;陸鳳

1.一種生產核黃素的工程菌株，其特征在于，所述菌株為芽孢桿菌(Bacillus)，并且所述菌株的基因組中整合有外源基因表達盒，所述的外源基因表達盒含有以下元件：P15啟動子和核黃素操縱子基因。

2.如權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的外源基因表達盒包含第一外源基因表達盒和第二外源基因表達盒。

3.如權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的第一外源基因表達盒還含有AmyE基因元件。

4.如權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的工程菌株是經原生質體融合獲得的重組子。

5.如權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述菌株的基因組中外源基因(核黃素操縱子基因)的拷貝數為10-50個，較佳地為20-40個。

6.一種生產核黃素的方法，其特征在于，包括步驟：

(i)培養權利要求1所述的工程菌株，從而獲得含核黃素的發酵產物；和

(ii)從所述發酵產物中分離出核黃素。

7.一種構建權利要求1所述工程菌株的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)構建含有第一外源基因表達盒的載體，所述第一外源基因表達盒具有以下元件：AmyE基因、P15啟動子和核黃素操縱子基因；

(b)構建含有第二外源基因表達盒的載體，所述第二外源基因表達盒具有以下元件：P15啟動子和核黃素操縱子基因；

(c)將步驟(a)和步驟(b)獲得的載體分別轉入受體菌株，獲得基因組整合有第一外源基因表達盒的第一重組菌株和基因組整合有第二外源基因表達盒的第二重組菌株；

(d)對第一重組菌株和第二重組菌株進行原生質體融合，獲得基因組中整合有第一外源基因表達盒和第二外源基因表達盒的重組子，所述的重組子即為權利要求1所述的工程菌株。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的受體菌株為枯草芽胞桿菌Bacillussubtilis，較佳地為Bacillus subtilis SMY。

9.一種權利要求1所述工程菌株的用途，其特征在于，所述菌株被用作發酵生產核黃素的工程菌。

10.一種制備食品組合物的方法，其特征在于，包括步驟：

將權利要求2所述方法制備的核黃素添加到食品組合物中，從而獲得含有核黃素的食品組合物。