[發(fā)明專利]抗生素pyrazolofluostatin A-C及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710008234.4
• 申請日: 2017-01-05
• 公開（公告）號: CN106831589B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設計）人: 張長生;張文軍;楊春芳;黃春帥;張麗萍;張海波
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C07D231/54
• 分類號: C07D231/54;A61K31/416;A61P39/06;C12P17/10;C12R1/29
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發(fā)明公開了抗生素pyrazolofluostatin A?C及其制備方法和應用。pyrazolofluostatins A–C，結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，其是由小單孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160發(fā)酵產(chǎn)生，Pyrazolofluostatin A?C是具有吡唑環(huán)結(jié)構(gòu)的新穎的fluostatins家族化合物。吡唑環(huán)是一個重要的藥理活性基團，進一步對pyrazolofluostatins A–C進行活性篩選，有望成為藥物先導小分子。。

技術領域：

本發(fā)明屬于工業(yè)微生物領域，具體涉及新的抗生素pyrazolofluostatin A-C及其制備方法和應用。

背景技術：

Fluostatins是一類非典型角環(huán)素類化合物，這一家族的化合物結(jié)構(gòu)多樣，具有抗菌、抗腫瘤、蛋白酶抑制等多種生物活性。Pyrazolofluostatin A-C是具有吡唑環(huán)結(jié)構(gòu)的新穎的fluostatins家族化合物。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一個目的是提供三種新的非典型角環(huán)素pyrazolofluostatins A-C。

本發(fā)明的三種新的非典型角環(huán)素pyrazolofluostatin A-C，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：

化合物1為pyrazolofluostatin A，R₁為OH，C1為R構(gòu)型，R₂為OH，C2為S構(gòu)型，R₃為OH，C3為S構(gòu)型；化合物2為pyrazolofluostatin B，R₁為OH，C1為R構(gòu)型，R₂為OH，C2為R構(gòu)型，R₃為OH，C3為S構(gòu)型；化合物3為pyrazolofluostatin C，R₁為OH，C1為R構(gòu)型，R₂為OH，C2為R構(gòu)型，R₃為H，C3為S構(gòu)型。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種制備抗生素pyrazolofluostatin A-C的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)制備小單孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160的發(fā)酵培養(yǎng)物，將該發(fā)酵培養(yǎng)物的發(fā)酵液和菌絲體分離開，發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂吸附，后用丙酮洗脫大孔樹脂，洗脫液回收丙酮后剩余的水混合液用丁酮萃取，丁酮層經(jīng)蒸餾濃縮后得到浸膏A；菌絲體先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮層經(jīng)蒸餾濃縮后得到浸膏B；

b)將浸膏A和浸膏B合并的粗提物經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇作為洗脫劑，從體積比100：0～0：100進行梯度洗脫，收集氯仿/甲醇體積比50:50梯度洗脫下來的餾分Fr.4，后經(jīng)LH-20凝膠柱，以氯仿/甲醇體積比1:1作為流動相洗脫，洗脫餾分再經(jīng)HPLC制備分離，得到化合物pyrazolofluostatin A-C。

所述的a步驟的制備小單孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160的發(fā)酵培養(yǎng)物是通過以下方法制備：將活化的小單孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160接入種子培養(yǎng)基，28℃，200rpm，培養(yǎng)144h得種子液，將種子液以10％的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃，200rpm，振蕩培養(yǎng)120h，而制得發(fā)酵培養(yǎng)物，所述的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方都為每升培養(yǎng)基中含有：淀粉10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，玉米粉3g，牛肉膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，K₂HPO₄ 0.5g，CaCO₃ 2g，余量為海鹽質(zhì)量分數(shù)為3％的海水或陳海水。