[發明專利]一種熒光探針PMPA及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710008220.2
• 申請日: 2017-01-05
• 公開（公告）號: CN106800531B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 鈔建賓;王會娟;宋凱倫;張永斌;王娟娟
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07D213/64
• 分類號: C07D213/64;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發明提供了一種熒光探針PMPA及其制備方法與應用。所述的熒光探針是1?(芘?1?基)?3?(6?甲氧基吡啶?3?基)丙烯酮。其制備方法：按摩爾比3:3?5將1?乙酰芘、6?甲氧基?吡啶?二甲醛溶解于無水乙醇中，然后加入氫氧化鈉溶液,常溫下繼續攪拌32小時，TLC跟蹤反應；最后加入無水乙醇，生成大黃色的絮狀沉淀；靜置，抽濾，干燥，即得到黃色固體。該熒光探針對pH的檢測是比率型的，對HSO₃^?的檢測是熒光淬滅，通過結合激光共聚焦技術，可用于生物樣品中pH和HSO₃^?變化的檢測。

技術領域

本發明涉及熒光探針，具體屬于一種熒光探針及其制備方法，以及該探針應用于生物樣品中pH和亞硫酸氫根的檢測。

背景技術

HSO₃^-和pH在現代工業和生產生活中具有重要意義。亞硫酸鹽因為能夠抑制氧化和微生物生長以及著色等優點被廣泛應用于食物和飲料。但是亞硫酸過量會引起一些疾病，如過敏反應、哮喘、腸胃和皮膚過敏疾病等。WHO規定每人每日亞硫酸鹽的允許攝入量為0-0.7mg/Kg(以SO₂計)?，F在工業生產中釋放大量的二氧化硫，形成的酸雨嚴重腐蝕建筑物和莊稼，并且會導致河流湖泊過度酸化。因此在生物和實際樣品中方便快速檢測亞硫酸鹽十分必要的。

細胞內的pH在參與細胞活動中起著必不可少的作用，比如：細胞循環調控、細胞的生長和凋亡、離子轉運、酶活性、鈣調控、肌肉收縮和多用耐藥性等方面。

pH異常會導致細胞功能紊亂甚至嚴重者會引發諸如炎癥、癌癥、阿爾茨海默癥等疾病。因此，對pH值的動態變化進行靈敏、準確的實時監測能夠為分子水平上研究細胞的生理和毒理過程提供重要的信息。

目前已經存在的亞硫酸鹽檢測方法有色譜法。傳感器法、電化學法、毛細血管電泳和酶技術聯用等。常用于pH的檢測方法有微電極、NMR和紫外吸收光譜等。但這些方法具有很大的局限性，如儀器昂貴、處理復雜、費事等，不利于檢測。相反熒光光譜檢測技術具有快速實時響應、分辨率高、靈敏度高、操作簡便、非破壞性等優點，且基于熒光探針與分子作用引起的熒光信號變化的傳感、熒光顯微成像的熒光光譜法顯示出獨特的時間和空間上的優勢，結合激光共聚焦顯微鏡，熒光成像技術成為分子水平上進行實時原位監測細胞內pH和HSO₃^-的重要手段?，F在文獻報道了許多用于檢測pH或HSO₃^-的熒光探針，但是能同時檢測pH和HSO₃^-的熒光探針是非常少的。因此，這就迫切需要計和合成具有合成簡單、靈敏度高、選擇性好、檢出限低、光穩定性好的能檢測生物樣品的pH和HSO₃^-變化的熒光探針。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種熒光探針PMPA。目的之二是提供該探針PMPA的制備方法，該制備工藝簡單，成本低廉。目的之三是提供該探針的用途，即應用于生物樣品pH和HSO₃^-變化的檢測。該探針應具有快速響應、靈敏度高、選擇性、檢出限低和光穩定性好，并且具有大的Stokes位移，能夠有效減小生物樣品自身熒光的干擾的優點。

本發明提供了一種熒光探針PMPA，其是1-(芘-1-基)-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙烯酮，結構式為：

本發明提供的一種的熒光探針PMPA的制備方法，包括如下步驟：

(1)按摩爾比3:3-5將1-乙酰芘、6-甲氧基-吡啶-二甲醛溶解于無水乙醇中，并且在室溫下攪拌至反應物完全溶解，呈淡黃色溶液；

(2)然后加入氫氧化鈉溶液,常溫下繼續攪拌32小時，TLC跟蹤反應(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝1：10)；