[發(fā)明專利]一種熒光探針PMPA及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710008220.2
• 申請(qǐng)日: 2017-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN106800531B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鈔建賓;王會(huì)娟;宋凱倫;張永斌;王娟娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D213/64
• 分類號(hào): C07D213/64;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種熒光探針PMPA，特征在于，其結(jié)構(gòu)式為：

2.如權(quán)利要求1所述的一種熒光探針PMPA的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)按摩爾比3:3-5將1-乙酰芘、6-甲氧基-吡啶-3-甲醛溶解于無水乙醇中，并且在室溫下攪拌至反應(yīng)物完全溶解，呈淡黃色溶液；

(2)然后加入氫氧化鈉溶液,常溫下繼續(xù)攪拌32小時(shí)，TLC跟蹤反應(yīng)；

(3)最后加入無水乙醇，生成黃色的絮狀沉淀；靜置，抽濾，干燥，即得到黃色固體PMPA。

3.一種定量熒光檢測酸性條件下pH的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的如權(quán)利要求1所述的熒光探針PMPA儲(chǔ)備液；

(2)將2.0mL蒸餾水以及30.0μL熒光探針PMPA儲(chǔ)備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，527nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱，417nm處的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)；

(3)以pH為橫坐標(biāo)，以相對(duì)熒光強(qiáng)度I_417nm/I_527nm為縱坐標(biāo)繪制圖并進(jìn)行Sigmoidal擬合，求得pK_a＝2.70；通過線性擬合得到熒光探針的最佳線性響應(yīng)范圍為pH1.26-3.97，回歸方程為：I_417nm/I_527nm＝-4.64×pH+19.87，線性相關(guān)系數(shù)為R²＝0.9906。

4.一種定量熒光檢測堿性條件下pH的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的如權(quán)利要求1所述的熒光探針PMPA儲(chǔ)備液；

(2)將2.0mL蒸餾水以及30.0μL熒光探針PMPA儲(chǔ)備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，527nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱，460nm處的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)；

(3)以pH為橫坐標(biāo)，以相對(duì)熒光強(qiáng)度I_527nm/I_460nm為縱坐標(biāo)繪制圖并進(jìn)行Sigmoidal擬合，求得pK_a＝9.32；通過線性擬合得到熒光探針的最佳線性響應(yīng)范圍為pH8.50-10.35，回歸方程為：I_527nm/I_460nm＝-1.15×pH+12.46，線性相關(guān)系數(shù)為R²＝0.9904。

5.一種定量熒光檢測HSO₃^-的方法，其特征在于，步驟為:

(1)用DMSO配制1mM的如權(quán)利要求1所述的熒光探針PMPA儲(chǔ)備液；

(2)將2.0mL pH＝4.00的PBS緩沖溶液以及30.0μL熒光探針PMPA儲(chǔ)備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，527nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱；

(3)以HSO₃^-濃度為橫坐標(biāo)，以相對(duì)熒光強(qiáng)度△F為縱坐標(biāo)繪制圖，得到HSO₃^-濃度的工作曲線，線性回歸方程為：△F＝63.53[HSO₃^-]+21.69，HSO₃^-濃度的單位為10^-6mol/L；線性相關(guān)系數(shù)為R²＝0.9943，最佳線性響應(yīng)范圍為0μM-6.5μM，檢出限(LOD)為0.32μM。

6.如權(quán)利要求1所述的一種熒光探針PMPA在動(dòng)物或微生物樣品中pH檢測中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求1所述的一種熒光探針PMPA在動(dòng)物或微生物樣品中HSO₃^-檢測中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求1所述的一種熒光探針PMPA在動(dòng)物或微生物細(xì)胞成像中的應(yīng)用。