[發(fā)明專利]封閉CD47并激發(fā)抗腫瘤免疫的重組溶瘤腺病毒及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710007784.4
• 申請日: 2017-01-05
• 公開（公告）號: CN108277234A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢其軍;金華君;呂賽群;劉品一;黃耀;李林芳;丁娜;吳孟超
• 申請（專利權(quán)）人: 上海白澤生物科技有限公司;上海細(xì)胞治療工程技術(shù)研究中心集團(tuán)有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N7/01;A61K35/761;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發(fā)明涉及封閉CD47并激發(fā)抗腫瘤免疫的重組溶瘤腺病毒及其用途。具體而言，本發(fā)明提供一種重組溶瘤腺病毒載體，其可操作地插入或者包含下述外源基因：SIRPα?Fc基因，即SIRPαCV1結(jié)合區(qū)與人IgG1 Fc段基因的融合基因或其簡并序列；或SIRPα?Fc基因通過連接序列與其他外源基因連接形成的多核苷酸序列或其簡并序列。本發(fā)明的重組溶瘤腺病毒可在腫瘤細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)外源基因SIRPα?Fc，SIRPα?Fc能與腫瘤細(xì)胞表面CD47特異性結(jié)合，阻斷CD47?SIRPα的負(fù)調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，并能同時(shí)引發(fā)ADCC效應(yīng)和CDC效應(yīng)，激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫，增強(qiáng)抗腫瘤效能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程學(xué)和腫瘤學(xué)，涉及封閉CD47并激發(fā)抗腫瘤免疫的重組溶瘤腺病毒及其用途。

背景技術(shù)

惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類生命健康的一大類疾病，傳統(tǒng)的抗腫瘤治療手段包括手術(shù)治療、化療和放療等，雖取得一些療效，但因各自治療的局限性始終無法達(dá)到預(yù)期的效果，研究表明癌癥發(fā)病率及死亡率均呈明顯上升趨勢。近幾年，隨著對腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)理研究的不斷深入，包括基因治療在內(nèi)的生物治療已經(jīng)成為腫瘤臨床中不可或缺的一部分。腺病毒因其致病性弱、基因攜帶能力強(qiáng)、與宿主細(xì)胞基因組整合風(fēng)險(xiǎn)低及基因組較易修飾并可大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，是基因治療中最常用的病毒載體。據(jù)J Gene Med統(tǒng)計(jì)，截至2016年2月，全球共有2356項(xiàng)基因治療進(jìn)入臨床試驗(yàn)，其中使用腺病毒作為載體的數(shù)量最多，達(dá)499項(xiàng)，占總數(shù)的21.2％。

經(jīng)過基因改造的溶瘤腺病毒能相對特異地在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，裂解腫瘤細(xì)胞，而釋放的子代病毒又可以感染周圍腫瘤細(xì)胞，通過級聯(lián)放大作用，高效殺傷腫瘤細(xì)胞，清除腫瘤病灶。在我國，溶瘤腺病毒藥物H101聯(lián)合化療在多種類型惡性腫瘤的臨床治療或臨床實(shí)驗(yàn)中顯示了部分療效(Current Cancer Drug Targets，2007，7(2):141-8)。近年來，溶瘤腺病毒在增強(qiáng)免疫方面的功能逐漸被認(rèn)知與重視(Viruses，2015，7(11):5780-91；NatRev Drug Discov.，2015，14(9):642-62)。溶瘤腺病毒在裂解腫瘤細(xì)胞時(shí)，可促使腫瘤細(xì)胞免疫性死亡，包括免疫性細(xì)胞凋亡、壞死、自噬性細(xì)胞死亡等，上調(diào)鈣網(wǎng)蛋白、熱休克蛋白在細(xì)胞膜上的含量，釋放ATP、高遷移率族蛋白B1(High-Mobility Group Box1，HMGB1)、尿酸等損傷相關(guān)因子、病原相關(guān)分子、危險(xiǎn)信號分子以及腫瘤相關(guān)抗原，從而進(jìn)一步激活樹突狀細(xì)胞(DC)功能，提升抗腫瘤免疫反應(yīng)(Front Oncol.，2014Apr 10，4:74.)。研究證實(shí)，腺病毒可作為TLR9 (Toll-Like Receptor)的激動劑，促進(jìn)DC細(xì)胞成熟，并增強(qiáng)I型IFN的免疫反應(yīng)(J Virol.，2012，86(11):6279-85)。另外，腺病毒還被證明可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞下調(diào)免疫相關(guān)信號通路，并通過增強(qiáng)IFNγ反應(yīng)，誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-AssociatedMacrophages，TAM)向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變，從而重塑腫瘤微環(huán)境，發(fā)揮治療作用(Oncotarget，2016，7(2):1500-15)。