[發(fā)明專利]封閉CD47并激發(fā)抗腫瘤免疫的重組溶瘤腺病毒及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710007784.4
• 申請(qǐng)日: 2017-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN108277234A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢其軍;金華君;呂賽群;劉品一;黃耀;李林芳;丁娜;吳孟超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海白澤生物科技有限公司;上海細(xì)胞治療工程技術(shù)研究中心集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/861
• 分類號(hào): C12N15/861;C12N7/01;A61K35/761;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種重組溶瘤腺病毒載體，其可操作地插入或者包含下述外源基因：

SIRPα-Fc基因，即SIRPαCV1結(jié)合區(qū)與人IgG1Fc段基因的融合基因，或其簡(jiǎn)并序列；或

SIRPα-Fc基因通過連接序列與其他外源基因連接形成的多核苷酸序列或其簡(jiǎn)并序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組溶瘤腺病毒載體，其中，所述重組溶瘤腺病毒載體可操作地插入或者包含依次連接的下述外源基因：

組成型強(qiáng)啟動(dòng)子、融合基因SIRPα-Fc或其簡(jiǎn)并序列、SV40PolyA和第一絕緣子序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組溶瘤腺病毒載體，其特征在于，所述重組溶瘤腺病毒載體具有如下的(1)－(14)中的任一項(xiàng)或者多項(xiàng)：

(1)所述SIRPαCV1結(jié)合區(qū)的序列如SEQ ID NO：4所示；

(2)所述人IgG1Fc段基因的序列如SEQ ID NO：5所示；

(3)所述SIRPαCV1結(jié)合區(qū)序列和人IgG1Fc段基因經(jīng)由編碼接頭序列的多核苷酸序列連接；優(yōu)選地，所述接頭序列含有一個(gè)或多個(gè)甘氨酸，優(yōu)選為GGC；更優(yōu)選地，所述SIRPα-Fc基因的序列如SEQ ID NO：6所示；

(4)所述組成型強(qiáng)啟動(dòng)子為CCAU、CMV、CAG、SV40、EF-1α、Ubc或PGK啟動(dòng)子；優(yōu)選為CCAU或CMV啟動(dòng)子；優(yōu)選地，所述CCAU啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；優(yōu)選地，所述CMV啟動(dòng)子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

(7)所述第一絕緣子序列如SEQ ID NO：1所示；

(8)所述外源基因可操作地連接或插入在腺病毒E1B區(qū)；

(9)所述腺病毒E1B區(qū)的19KDa與55KDa蛋白編碼序列缺失；

(10)所述腺病毒E1A的啟動(dòng)子為人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子、癌胚抗原啟動(dòng)子、甲胎蛋白啟動(dòng)子、前列腺素特異性抗原的啟動(dòng)子或缺氧誘導(dǎo)因子-1調(diào)控的缺氧反應(yīng)元件啟動(dòng)子；優(yōu)選為人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子；更優(yōu)選地，所述人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子的序列如SEQ IDNO：7所示；

(11)所述腺病毒E1A表達(dá)框與外源基因所在表達(dá)框的方向相反；

(12)所述人端粒酶啟動(dòng)子前包含第二絕緣子序列，所述第二絕緣子序列與第一絕緣子序列相同或者不同；具體地，所述第二絕緣子序列如SEQ ID NO：8所示；

(13)所述腺病毒為C亞屬；

(14)所述腺病毒為利用35型腺病毒的纖毛蛋白替換5型腺病毒纖毛蛋白構(gòu)建成的嵌合型腺病毒載體。

4.一種包含外源基因的重組腺溶瘤病毒，其中，所述外源基因?yàn)镾IRPαCV1結(jié)合區(qū)的基因與人類IgG1的Fc段基因的融合基因，即SIRPα-Fc基因；

優(yōu)選地，所述SIRPαCV1結(jié)合區(qū)的基因和人IgG1的Fc段基因在同一個(gè)表達(dá)框內(nèi)；

更優(yōu)選地，所述SIRPαCV1結(jié)合區(qū)的基因和人IgG1的Fc段基因能夠以融合蛋白形式高效表達(dá)。

5.一種重組腺溶瘤病毒，其含有權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒載體；

優(yōu)選地，所述重組腺溶瘤病毒由權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒載體在HEK293細(xì)胞中重組得到。

6.保藏編號(hào)為CCTCC NO:V201637的重組溶瘤腺病毒。

7.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒載體或者權(quán)利要求4至6中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒在制備治療和/或預(yù)防和/或輔助治療癌癥或者抗腫瘤的藥物中的用途。

8.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌癥或者腫瘤為肺癌、肝細(xì)胞癌、淋巴瘤、結(jié)腸癌、大腸癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、胃癌、膽管癌、膽囊癌、食管癌、腎癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌或頭頸癌。

9.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒載體或者權(quán)利要求4至6中任一項(xiàng)所述的重組溶瘤腺病毒在制備殺傷腫瘤細(xì)胞特別是腫瘤干細(xì)胞的藥物中的用途。

10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞為選自下列腫瘤的細(xì)胞：

肺癌、肝細(xì)胞癌、淋巴瘤、結(jié)腸癌、大腸癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、胃癌、膽管癌、膽囊癌、食管癌、腎癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌或頭頸癌。