[發明專利]經修飾的CCP抗原及其用途和抗CCP抗體檢測試劑盒及其制造方法

有效

• 申請號: 201710006139.0
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN108267576B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 饒微;魏亞慶;袁錦云;劉蕾;李婷華;許然
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: C07K7/50
• 分類號: C07K7/50;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市盈方知識產權事務所(普通合伙) 44303
• 代理人: 楊賢

本發明屬于體外診斷技術領域，具體涉及一種經修飾的CCP抗原，所述CCP抗原具有下式I所示的序列：其中，式I中的谷氨酸E的羧羥基被R基團取代，所述R基團選自：C_1?10烷基氧基，C_1?10烷基?CO?NH?基和C_1?10烷基?CO?NH?NH?基；所述C_1?10烷基任選被一個或多個選自C_1?4烷基，C_1?4烷基氧基，羥基，氨基，硝基和苯基的取代基取代。本發明還涉及該抗原用于檢測抗CCP抗體的用途，包括該抗原的抗CCP抗體檢測試劑盒及其制造方法。本發明的優勢包括經修飾的CCP抗原連接蛋白載體后的衍生物的抗原活性更高；抗CCP抗體檢測的精密度更高；抗CCP抗體檢測的準確度更高。

技術領域

本發明屬于體外診斷技術領域，具體涉及一種經修飾的CCP抗原，該抗原用于檢測抗CCP抗體的用途，包括該抗原的抗CCP抗體檢測試劑盒及其制造方法。

背景技術

類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一種累及周圍關節為主的多系統、炎癥性、自身免疫性、致畸性疾病。該病在歐美國家的發病率為1％，我國為0.32％～0.36％。該病在起病2年內即可出現不可逆的骨關節破壞，是造成人群勞動力喪失的主要原因之一。

郭大文等研究發現抗環瓜氨酸肽抗體對類風濕性關節炎的發病具有預測價值(郭大文，王曄，高紅華，等.抗環瓜氨酸肽抗體對類風濕性關節炎發病的預測價值[J].中國實驗診斷學，2005，9(1)：13-14)。

抗環瓜氨酸肽(Cyclic Citrullinated Peptide，CCP)抗體是以IgG型為主的抗體。抗CCP抗體是由RA患者的B淋巴細胞自發分泌的，而其他疾病患者和正常人群B淋巴細胞并不自發分泌抗CCP抗體。因此，抗CCP抗體對RA具有較高的特異性。抗CCP抗體的檢測現多采用固相合成法來人工合成含瓜氨酸的肽段。最初使用含19個氨基酸的直鏈線性瓜氨酸肽段，其氨基酸序列為：SHQESTXGRSRGRSGRSGS。然而研究發現用直鏈線性瓜氨酸肽段為底物，用ELISA法來檢測抗環瓜氨酸肽抗體常會導致失敗，原因是由于此肽段不能吸附于聚苯乙烯上。后來，為了提高瓜氨酸肽鏈的抗原活性，克服直鏈線性瓜氨酸肽段的不足，荷蘭學者Schellekens GA(Schellekens GA，Visser H，de Jong BA，van den Hoogen FH，Hazes JM，Breedveld FC et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritisantibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide.Arthritis Rheum 2000；43：155-163)將上述由19個氨基酸殘基組成的一條瓜氨酸肽鏈中的兩個絲氨酸替換成半胱氨酸，并使半胱氨酸環化形成β-轉角結構相似的二硫鍵，而成為環瓜氨酸肽。

Anti-CCP抗體的檢測對RA的診斷具有高度的特異性(特異性在90％以上)，并可用于RA的早期診斷。大約70％的RA患者在發病早期，血清中即可出現Anti-CCP抗體，而且抗體陽性的患者比抗體陰性的患者易發展成為可通過放射性方法檢測到的骨關節損害。TiercyJM(Rheumatology，2002，41(7)：809)研究Anti-CCP抗體、AKA和IgM-RF在區別RA與其他風濕性疾病中的意義時發現：IgM-RF對RA診斷的敏感性高(75％)，其次是Anti-CCP抗體(68％)；而Anti-CCP抗體對RA診斷的特異性最高(96％)，其次為AKA(94％)；而IgM-RF對RA診斷的特異性僅74％。所以，在診斷RA時，Anti-CCP抗體比IgM-RF具有更高的特異性。

目前的Anti-CCP診斷技術主要包括酶聯免疫試驗(ELISA)、化學發光(CLIA)、免疫層析法(膠體金或乳膠顆粒法)、時間分辨免疫熒光分析法(TRFIA)、免疫斑點試驗，這些方法都有各自的優勢和缺點。