[發明專利]人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒

在審

• 申請號: 201710004643.7
• 申請日: 2017-01-04
• 公開（公告）號: CN106755448A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 韋玉軍;吳遠航;李航;蘇軍
• 申請（專利權）人: 安徽安龍基因醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240
• 代理人: 王桂名

1.一種人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包含29對STR基因座的特異性擴增引物，其中STR基因座為:DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448、DYS456、DYS390、DYS449、DYS576、DYS481、DYS549、DYS533、DYS570、DYS643、DYS460、DYS627、DYS387a/b、DYS518。

2.根據權利要求1所述的一種人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒，其特征在于：針對上述29個基因座在其重復序列的側翼分別設計特異性熒光標記引物。

3.根據權利要求1所述的一種人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒，其特征在于：所述的26對STR基因座的特異性擴増引物分為五組:第一組，DYS392、DYS389I、DYS449、DYS389II、DYS438、DYS526、DYS570；第二組，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b；第三組,DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458；第四組,DYS393、Y GATA H4、DYS439、DYS635、DYS570、DYS643；第五組,DYS549、DYS627、DYS387a、DYS387b、DYS518；每對引物中至少一條采用熒光染料標記其5'端。

4.根據權利要求1所述的一種人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒，其特征在于：所述的人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒包括反應混合液、26對STR基因座的特異性擴増引物、29個基因座的等位基因、熱啟動Taq酶、DNA標準品、sdH20和熒光分子量內標，具體成分為：

5.根據權利要求1所述的一種人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒，其特征在于：所述的反應混合液的組成為：MgCl₂ 7.5mM，Tris-HCl 125mM，KCl 125mM，dNTPs7.5mM，BSA 2g/L。

6.一種采用權利要求1-5任一所述的人類Y染色體29個STR基因座的熒光標記復合擴增試劑盒在法醫鑒定、親權鑒定和DNA家譜構建中的檢測方法，其特征在于：具體檢測方法為：將試劑盒內試劑與樣品DNA裝入PCR擴増管，置于熱循環儀上，進行PCR擴增，然后在4℃的條件下進行保溫，得到擴增產物，將擴增產物在遺傳分析儀上進行熒光檢測，再用片段分析軟件GeneMapper分析基因測序儀上進行檢測，即得到檢測結果。

7.根據權利要求6所述的一種檢測方法，其特征在于：Y染色體STR基因座的擴増采用聚合酶鏈式反應，其擴増產物的檢測采用毛細管電泳、聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳，聚合酶鏈式反應的擴增程序為：95℃2min，94℃30S、59℃1min、72℃1min，共29個循環；60℃30min。

8.根據權利要求6所述的一種檢測方法，其特征在于：所述的樣品DNA包括利用Che1ex法、磁珠提取法或有機抽提法中任意一種方法提取的人基因組DNA，或采用免提取的、濾紙、FTA卡、棉簽、紗布中任意一種裁體收集的人類血液或口腔細胞。

9.根據權利要求6所述的一種檢測方法，其特征在于：所述的檢材的來源包括人的血液、血痕、精液、唾液、體液、毛發、肌肉或組織器官。